凋亡细胞对巨噬细胞IL-12家族细胞因子调控分析.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………．．1 英文摘要…………………………………………………………………．．4 英文缩写…………………………………………………………………．．8 研究论文凋亡细胞对巨噬细胞IL．12家族细胞因子调控的研究 前言………………………………………………………………………………………99刖舌………………………………………………………………………………………· 材料与方法…………………………………………………………．10 结果………………………………………………………………………………………·23 附图………………………………………………………………………26 讨{仑………………………………………………………………………………………．34 结论………………………………………………………………………………………·36 参考文献……………………………………………………………37 综述凋亡细胞清除的基本生物学和治疗潜力………………………一39 致谢………………………………………………………………………………………………50 个人简历…………………………………………………………………51 万方数据 中文摘要 凋亡细胞对巨噬细胞IL-12家族细胞因子调控的研究 摘 要 cell，apo)，避免 目的：机体通过吞噬作用清除凋亡细胞(apoptotic 凋亡细胞的具有潜在细胞毒性、免疫原性或致炎性的坏死成分暴露在周围 环境中引发自身免疫反应和炎症反应，这是机体一种重要的防御功能。因 此快速有效清除体内的凋亡细胞对人体正常生长发育和维持内环境稳定 起着至关重要的作用，凋亡细胞主要由专职吞噬细胞如巨噬细胞、未成熟 的树突状细胞等吞噬清除，部分被非专职吞噬细胞如成纤维细胞、上皮细 胞等吞噬。机体控制炎症不单单是通过快速有效的清除凋亡细胞，还包括 调控炎症性细胞因子产生。近年来又有很多实验证明细胞因子表达水平的 变化与很多疾病相关，比如，白细胞介素．23(IL．23)高表达与类风湿性 关节炎(RA)、银屑病等自身免疫病和肿瘤等疾病相关，IL．12又对黑色 素瘤、肠腺癌、肝癌【．71等肿瘤有抑癌作用。还有大量实验发现凋亡细胞被 巨噬细胞等抗原提呈细胞吞噬过程中会调控其细胞因子表达水平，比如正 向调节IL．10和负向调节IL．12等。 病的相关性已经有很多实验报道，对于其作用机制也有了很多了解，本实 验由此着手，研究凋亡细胞对巨噬细胞受刺激表达IL．12家族细胞因子的 调控方向和调控机制，重点研究IL．23细胞因子，为明确相关疾病的发生 发展和细胞因子临床应用奠定分子学基础。 方法： lJurkat细胞(人外周白血病T细胞)的复苏、培养及凋亡细胞的 制备，流式细胞技术检测细胞凋亡情况。 2小鼠腹腔巨噬细胞的提取、培养。 3 RAW264．7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞分别用空白、凋亡细胞 (apotosis (Real．time 万方数据 中文摘要 (PGE2)和转化生长因子．13(TGF．13)的量。 RNA设计随机引物，对各组刺激后RAW细胞做 5针对IL．23p19 Real．time PCR检测IL．23p19转录前水平。 裂解检测各组荧光素蛋白强度。 7对RAW细胞分别用凋亡细胞、凋亡细胞+LPS刺激，刺激后加入 RNA产生，检测两组各时间点p19mRNA衰变情况。 8用Western 和磷酸化p38的含量。 9用不同浓度的MAPK RAW细胞后用LPS刺激，Real-time PCR检测各组p19mRNA水平。