农杆菌介导Acs基因转化大白菜的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 大白菜是人们喜爱的大众蔬菜。近年来由于育种工作者的不断努力，大白菜育种已取得 很大成就。但随着人口数量的不断增长，提高白菜产量，改良白菜品质仍是当前重要任务。 通过分析和鉴定植物基因功能、发掘有益基因并用于育种，已成为发展趋势，因此白菜功能 基因组的研究迫在眉睫。通过突变体来研究基因功能是研究基因最直接的方法之一。白菜突 变体库的构建可为分析白菜基因的功能提供理想的材料，白菜突变体的构建还能获得新性 状、新类型，扩大生物多样性，为遗传育种提供中间材料和新的种质资源。 本实验通过农杆菌介导的遗传转化，将构建的Ac ，Ds 激活表达标签转化白菜中，获得 转基因的植株，为突变体的构建、转基因白菜后代筛选及分离克隆相关基因奠定基础。主要 研究结果如下： 1. 建立了高效的大白菜离体再生体系 4 日龄的 6 号大白菜高代自交系的子叶，置于诱导芽分化的培养基 （MS+5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/AgNO3 ）上，诱导的不定芽数最多。 2. 构建了以质粒pUbiTs，pBi121 为材料，构建了以CaMV35S 强启动子启动的激活表达标签 p35STs 载体。 3. 利用农杆菌介导的遗传转化法将表达载体导入大白菜，优化了6 号自交系的转化体系。 (1)确定大白菜转化过程中筛选剂为卡那霉素，潮霉素，最适浓度分别为10mg/L，5mg/L。 抑菌剂为羧苄青霉素，最适浓度为500 mg/L。 (2)确定外植体为子叶，农杆菌最适浓度 OD600=0.3，侵染时间5min，预培养36h，共培 养2d。 4. 抗生素筛选获得的大白菜T0 代转基因植株共26 株，经PCR、PCR-Southern 检测后得到的 转基因植株共有10 株。 关键词：大白菜；农杆菌；Ac/Ds 基因；遗传转化 I Abstract Studies On Transformation Of Ac/Ds Gene Of Chinese Cabbage By Agrobacterium Tumefaciens-Mediated Methods Abstract The Chinese cabbage is a kind of popular vegetable. Although great progress has been achieved in Chinese cabbage breeding in the recent years, improving its quantity and quality will still be the main task with the increasing population. Searching for interesting genes for breeding by identification and appraisal of plant gene function is of great importance. Studying the mutants to find out the function of related genes is one of the most effective methods in exploring redients the genes. So it is urgent to study the function of gene of Chinese cabbage. The construction of Chinese cabbage mutant library can not only provide us the useful materials in studying the function of the gene, but also bring us Chinese cabbage w