大白菜cms9细胞质雄性不育的分子特性及育种应用研究.pdfVIP

摘要 大白菜(Brass缸acamp醐isLasp．peMnens扫)起源于我国，是最具中国特色、国内播种面积 最大、产量最高的重要叶用蔬菜。我国大白菜资源丰富、品种类型多样，商品菜生产已经基本 实现周年供应。由于大白菜具有明显的杂种优势，当前主栽品种几乎均为杂种一代。利用雄性 不育系生产一代杂种已经成为大白菜育种的一种发展趋势，而细胞质雄性不育系的选育和利用 是以营养器官为食用对象的大白菜等蔬菜杂种优势育种的理想途径。目前，大白菜细胞质雄性 不育主要来源有3种：萝hOguCMS、甘蓝型油菜PolCMS和新型甘蓝型油菜CMS96。以往 的研究主要集中在对单一大白菜细胞质雄性不育系和保持系进行比较研究，本研究从分子生物 CMS、 学、同工酶或蛋白质、细胞学和植物学等方面初步探索3种大白菜细胞质雄性不育(Ogu Pol CMS和cMs96)的不育特征、特性，研究大白菜细胞质雄性不育这一具有重要理论意义和 经济价值的遗传现象本质，特别是探索大白菜CMS96不育系的败育机理，为更好地在大白菜 育种中应用CMS96细胞质雄性不育源奠定基础。 基于上述情况，本论文开展了以下五个方面的研究工作，获得的主要结论如下： CMS不育系更 进行多态性研究，RAPD和AFLP结果的聚类分析表明，大白菜CMS96和Ogu 为相近，遗传相似性较大。 获得与大白菜Ogu CMS、 获得仅与大白菜OguCMS不育系相关的3条RAPD片段。将OPAHl6引物在大白菜Ogu 2组引物E-ACG／M-CAT540和F,-ACT／M-CAT CMS不育系相关的6条 610获得与大白菜Ogu CMS不育系相关的22条AFLP片段；由 AFLP片段：由5组引物获得与大白菜CMS96和Ogu 5组引物获得与3种大白菜不育系相关的26条AFLP片段。 2．采用基于同源序列基因扩增法，利用设计的7组引物PCR扩增11份大白菜不育系和保 组混合引物多重PCR扩增产物可以将3种大白菜不育系以及保持系区分开；综合已获得的研究 CMS CMS 结果，提出大白菜CMS96不育系的不育基因为OguD棚38和Naporf222／nadSc二组 已有不育嵌合基因有机结合、重组形成的新型不育嵌合基因；推测大白菜CMS96原始不育源 CMS不育系原生质体对称融合的结果。 的获得是甘蓝型油菜OguCMS和Nap 技术进一步验证片段的特异性；克隆、测序和同源性比较，研究特异片段的核苷酸和氨基酸序 列特性。结果表明，7组引物在11份大白菜材料中均有扩增产物，除了口加9和COXI引物外， CMS不育 其余5组引物扩增产物均存在差异。4加6引物扩增的20abp产物可以将大白菜Ogu CMS不育系中有扩增产物；口舰4 系与其它不育系、保持系区别开；or：／224引物只在大白菜Pol CMS、CMS96不育系与其余不育系、保持系区别开； 和orfl38引物扩增产物可将大白菜Ogu orf222引物仅在大白菜PolCMS和CMS96不育系中有扩增产物，可以将二者与其它不育系和 CMS 开放阅读框，没有保守结构域；后者序列长度为669bp，具有ORF222开放阅读框，与Nap 二组引物的5种组合扩增大白菜CMS96不育系mtDNA，获得3组特异扩增产物。 种不育系和保持系仅一次PCR反应完全区别开，建立了一种快速鉴定3种大白菜细胞质