甘薯离体遗传转体系的建立及玉米醇溶蛋白基因的导入.pdfVIP

摘 要 摘 要 batatas 甘薯[1pomoeaL(Lam．)]不仅是一种广泛栽培的粮食作物，而且也是一种重要 的饲料、蔬菜和工业原料作物。自80年代以来，品质改良已逐步成为甘薯最重要的育种 目标，而蛋白质含量的提高及组成的改善已成为当前国内外甘薯品质育种的三人主攻方 表达启动子调控下的高必需氨基酸基因导入到甘薯优良栽培品种的基因组中，并获得了 经分子生物学检测的转基因再生植株及株系。这为实现外源基因在甘薯组织或器官中的 特异性表达和表达产物的特异性积累奠定了基础，也为研究甘薯块根专一性启动子的基 因调控模式提供了试验体系。f现将主要工作和结果报道如下： 1、甘薯离体再生系统的建立 从田间采取甘薯优良品种12份，以其茎段作为外植体，采用MS基本培养基进行离 体培养，以获得无菌试管苗培养系。结果表明，餐具洗涤剂缦泡15分钟，75％乙醇浸 泡30秒，再用含吐温．20的01％氯化汞浸泡lO分钟的杀菌效果最好。采用快速转移 接种除菌法可使外植体污染率大大降低，平均污染率降至5％以下。无菌试管苗的离体 生长特性研究表明，强光有利于试管苗的生长，而不同甘薯基因型在相同培养基和相同 培养条件下其生长状况存在着较大差异。 0 通过多因子正交试验，筛选出了甘薯愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+1m叠，I NAA+0．5 m鲫BA(愈伤组织诱导率达100％)：叶柄外植体产生愈伤组织的时间早、生 长快，是甘薯愈伤组织诱导和生长的最适外植体。同时，BA对甘薯愈伤组织的诱导影 响最大，其次是外植体．而NAA影响最弱。甘薯不定根诱导的最佳培养基为MS+1．0 mg／I NAA，在其上不定根诱导率可达95．2％；而茎段是甘薯不定根诱导的最适外植体。 比较了外植体、植物生长调节物、甘薯基因型、AgNO，等对甘薯不定芽诱导的影响。 结果表明，甘薯叶片和叶柄外植体在所试的试验条件下均未获得不定芽，而NAA对提 高甘薯茎段外植体产生不定芽的频率有促进作用，其中以NAA浓度为1．0 m∥l的效果 最佳，不定芽诱导率为654％。在试验串还观察到，不定芽主要从茎段外植体两端的切 口处产生，仅经历很短的愈伤组织阶段。不同浓度的BA对甘薯茎段外植体的不定芽形成 均表现出明显的抑制作用。在所试的甘薯基因型中，新大紫茎段外植体的不定芽诱导率 最高(100％)，渝苏303(92．9％)和高自l号(84O％)次之，绵粉1号晟差(为65．4％)。AgN0， 可明显地提高甘薯品种高自l号叶片外植体不定芽的诱导频率，其不定芽的诱导奉最高 可68，8％。 综合以上试验结果，建立了较简便且高效的甘薯离体再生途径，即：先将茎段外植 NAA+ 体培养在MS+1．0NAA培养基上，或将叶片外植体培养在MS+1．0 m∥l mg／l 6．0～80me,／lAgN03培养基上，以诱导产生不定芽。当不定芽伸长后，再将其转入MS 培养基(或附加】0 rfI创NAA)，不定芽即分化出不定根，从而形成再生植株。 西南农业大学博士学位论文 甘薯离体遗传转化体系的建立及玉米醇溶蛋白基凼的导入 2、甘薯离体遗传转化系统的建立 在优化的再生条件下，试验了甘薯外植体对卡那霉素(Kanamycin，Ka心和羧苄青霉 件、筛选程序、甘薯基因型等对转化频率的影响。 结果表明，不同基因型对Kan的耐受性是不同的，在含50 ITl鲫Kan的MSN培养基 上，绵粉1号和高自1号的茎段外植体均不能分化出不定芽，而新大紫茎段外植体的不 定芽出现率仍