茶叶中β-葡萄苷酶基因cDNA克隆与序列分析.pdfVIP

摘 要 茶树是我国重要的经济作物，香气是衡量茶叶品质好坏的关键指标之一。B一葡萄糖 苷酶在茶叶香气和抗逆性方面有着举足轻重的作用。因此，尝试从茶叶中获取B一葡萄糖 苷酶基医l的cDNA序列，将有助于进一步搞清B一葡萄糖苷酶在茶叶花果香气形成中的地位 和作用，充实茶叶香气形成的理论，也为以后利用基因工程手段改良茶树品种，提高茶叶 品质、抗病虫能力以及该酶的转化、调控的研究奠定基础。本论文首次从茶叶中克隆出B 一葡萄糖苷酶基因cDNA序列，结果如下： 依据茶树叶片生化特点。应用Chomcznski一步法，并作了部分修改，从鲜叶中分离、 提取总RNA。利用GenBank中已经登录的其它植物中该酶基因的保守序列，设计一对简并 上进行序列测定和分析，结果表明，此片段核菅酸序列与其他植物B一葡萄糖苷酶基因 cDNA相应序列有很好的同源性，推断该PCR特异产物为茶树B一葡萄糖苷酶基因cDNA片 段。 7端 以此特异片段设计特异引物，采用RACE技术分别获得B一葡萄糖苷酶eDNA3 581bp和5’端895bp片段，后再依据上述两段序列设计一对引物，扩增出酶的全长序列 1475bp。经B1ast搜索表明：克隆所得碱基序列和推导的氨基酸序列与已克隆出的小松树、 西葫芦拟南芥等植物体内D一葡萄糖苷酶基因的eDNA相应序列有4096--60％的同源性，因此 我们推断扩增所得到的序列为茶树中p一葡萄糖苷酶基因的cDNA。 利用分子生物学软件对氨基酸序列和二级结构进行分析和比较。结果表明，该序列的3’一 基酸，其转运肽长度为82个氨基酸，成熟蛋白由257个氨基酸组成。经Garnier法预测， 茶树B一葡萄糖苷酶蛋白二级结构与其他植物相似，螺旋构象14，33％、伸展构象33，81％、 折叠构象25．43％。前体蛋白的分子量为40kDa，等电点(PI)为5．2，为水溶性蛋白。 关键词 茶树 G一葡萄糖苷酶 聚合酶链式反应 生物信息学 互补DNA eDNA末端快速扩增 Abstract one of Tea[Camellia themost sinensis(L．)0．kutze】is economic important in isone ofthe China，Aroma index plants keys of the oftea weighing quality a function 3-Glucosidase(13一Glc)take toteaaromaand very stress． important Sowe triedto theeDNA get of3-GIcfromtea contributestomake plant．Th