副溶血性弧菌融合鞭毛基因的表达与免疫学性质.pdfVIP

维普资讯 394 中国兽医学报 2008年4月 第28卷 第4期 Chin_， SciApr．2008 Vo1．28 No．4 副溶血性弧菌融合鞭毛基因的表达与免疫学性质 李 涛1,2柳增盖2，魏艳华 ，王 颖 ，杜 承2，卢士英 ，张国才 ， (1．吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 130062；2．吉林大学教育部人兽共患病重点实验室 ，吉林 长春 130062；3．吉林省牧业管理局，吉林 长春 130051) 摘要：采用柔性Linker序列(Gly4Ser)对 目的基因进行串联(FlaA．rift-naB)，构建重组表达质粒pET-22b(+)．F3并在 E．coliBL21中进行表达，将表达蛋白纯化后免疫獭兔制备血清抗体，利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异 性与敏感性。结果显示，成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)一F3并在 E．coliBL21中得到表达，表达蛋白主要以 包涵体形式存在 (表达量23．5％)，基因序列全长3420bp，编码 1140个氨基酸，蛋 白相对分子质量为 119000，测序 结果与设计序列一致性为99％。ELISA和琼脂扩散试验表明，融合鞭毛F3与其他几种中毒性弧茵鞭毛具有一定的 免疫交叉性，与多种非 目标茵不发生反应。从而表明，多联融合鞭毛基因的表达质粒已构建成功并制备了抗血清， 为利用融合鞭毛的方法检测食物中毒性弧菌，进而建立食物中毒性弧茵广谱、快速的检测方法奠定了基础。 关键词：副溶血性弧菌；多联融合鞭毛；表达；免疫特性 中图分类号：c}78；s852．6l 文献标识码：A 文章编号：1005—4545(2008)04-0394-05 Expressionandimmunologicalcharacterofpoly-recombinantflageHaegenefor rioparahaemobti『cus LITao．一，L1U Zeng-shan2， WEIYah—hua3，WANGYing~，DUChenf，LUShi．yinf，ZHANGGuo—cai， (1． CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，JilinUn~ersity，Changchun130062，China；2．KeyLaborato一 ，yI厂DrZoonosisResearchMinistryofEducation，JilinUniversity，Changchun130062，China；3．BureauofAnimal husbandryand VeterinaryAdministratoininJilinProvince，Changchun130051，China) Abstract：啪 parahaemo／yt／cuspoly-rceombinantflageUaegeneandrecombinantexpressionvectorhavebeenconstructed， thenhteserumnatibodyofpoly-rceomb inantflagellaepre ．Usehteflexibilitylinker(Gly4Ser)to~x)nn~tthepurposegene (FlaA-FlaF-FlaB)，htenconstructrecombhmntplasmidpET-22b(+)一F3nadCalTyoutexpressioninE．coliBL21．Therabbits we豫 immunizedusinghteexpressionproteinafterpurificationtogetesnlnlantibody．Th eresuhsof ELISA nadagardiffusionreac— tionindicatedhtespecificiytandesnsitiviytofhtenatibody．Therceomb inantexpressing plasmidpET-22b(+)一F3wasconsturctde nadepxressedin E．coliBL21su