力生长因子在大肠杆菌中的表达及活性分析.pdfVIP

维普资讯 生 物 工程 学报 ChinJBiotech2008，July25；24(7)：1180-1185 journals．im．ac．cn ChineseJournalofBiotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im．ac．cn @ 2008InstituteofMicrobiology,CASCSM,Allrightsresewed 力生长因子在大肠杆菌中的表达及活性分析 张兵兵1,2，江鹏1,2鲜成玉1,2李玉筱1,2李大军1,2唐丽灵1,2王远亮 ， 1重庆大学生物工程学院，重庆 400030 2重庆大学国家 “985工程”生物材料与仿生工程研究中心，重庆 400030 摘 要：MGF(Mechano—growthfactor)是一种 IGF—l变体形式，研究发现该因子具有应力敏感性，并且具有促进肌 肉肥 大、再生以及神经损伤修 复的功能。通过RT-PCR从拉伸刺激的人成骨细胞 中克隆MGFcDNA序列，并去除 5。端 9bp 的序列，使N端缺少对肠激酶(Enterokinase，EK)具有抑制作用的脯氨酸，将截短型MGF(des(1-3)MGF)cDNA序列克隆 入 pET32a(+)质粒，构建重组表达质粒 。重组质粒转化E．coliBL21(DE3)，在 30。c培养下以可溶形式表达融合蛋白Trx／ des(1—3)MGF,采用离子交换层析和 Ni2+金属亲和层析，获得纯度95％~Z上的融合蛋白。再对融合蛋白EK酶切．rpHPLC 分离获得纯度达 98％的des(1-3)MGF,SDS—PAGE及质谱分析蛋 白分子量与理论值相符。生物活性实验显示，所制备的 des(1．3)MGF比des(1—3)IGF一1更显著的促进 MC3T3一E1细胞的增值和迁移。 关键词 ：胰 岛素样生长因子一1，力生长 因子，原核表达，增殖，迁移 ExpressionofM echano—growthFactorinEscherichiacoliand ActivityAnalysis BingbingZhangr，PengJiangr，ChengyuXian一，YuxiaoLi，-，DajunLi，-，LilingTang，-，and YuanliangWang1’2 1BioengineeringCollege，ChongqingUniversity，Chongqing400030，China 2National“985P iectProgramme”ResearchCenterofBioinspiredMaterialsScienceandEngineeHng，ChongqingUniversity，Chongqing400030，China Abstract：Mechano-growthfactor(MGF)isoneofIGF-1isoforms．MGF ismechanosensitiveandhasimportantfunctionsin musclehypertrophy，regenerationandnerveinjuryrecovery．Inhtisstudy，MGFcDNA (330bp)wasclonedfrom stretched osteoblastsbyRT-PCR．In ordertoavoidprolinresidueinhibitingenterokinasecleavage．9bpofMGFcDNA 5 endsequencewas truncatedbyprimer,htenhteobtainedtruncatedMGF (des(1—3)MGF1cDNA (321bp)wassubclonedinpET32a(+)vectorto constructaprokaryoticrecombinationexpressionplasmid，Trx／des(1-3)MGFfusionprotein，existinginformsofsolution，was expressde intransofmr edEscherichiacolfsrt