A族链球菌多介表位疫苗的完善制备及其动物免疫保护作用的相关分析研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 英文缩写……………………………………………………………………8 研究论文A族链球菌多价表位疫苗的完善制备及其动物免疫保护作用 的相关研究 第一部分多价表位疫苗的设计构建与表达 前言……………………………………………………………………9月lI舌…………………………………………………………………… 材料与方法…………………………………………………………10 结果……………………………………………………………………24 附图……………………………………………………………………25 讨论……………………………………………………………………28 第二部分重组多价表位疫苗的免疫作用的研究 前言……………………………………………………………………30 月U吾……………………………………………………………………jU 材料与方法……………………………………………………………30 结果……………………………………………………………………35 附图……………………………………………………………………37 讨论……………………………………………………………………42 结论……………．．……………………………………………………．44 参考文献………………………………………………………………44 综述…………………………………………………………………………47 致谢………………………………………………………………………55 个人简历…………………………………………………，………………．．56 万方数据 中文摘要 A族链球菌多价表位疫苗的完善制备及其动物免疫保护作用的 相关研究 摘 要 目的：A族链球菌(groupA 阳性菌，可以引起多种侵袭性感染和自身免疫性疾病。在大多数发展中 国家GAS感染导致的风湿热、风湿性心脏病、肾小球肾炎等仍然是严重 威胁人们生活质量的一大问题。而对于GAS感染的治疗目前大多为青霉 素、大环内酯类药物或静脉注射免疫球蛋白，但由于耐药性或保护作用 短暂等原因致使GAS感染仍旧保持着很高的复发率。所以制备成功有效 的GAS疫苗成为GAS预防和治疗的研究热点。 型的与人无交叉反应的部分基因及M蛋自的C端共同基序(J基因)的 GAS流行菌株中M12血清型占了一大部分。故本实验在本室构建好的质 粒的外源基因序列上插入M12与人无交叉反应的基因片段并表达，该蛋 白命名为F7M6，又以其为模板构建表达了只含有6个不同M蛋白血清 型的基因片段，该蛋白命名为M6。将F7M6蛋白，M6蛋白和本室保存 等实验技术观察细胞免疫和体液免疫效果，并攻毒后计算存活率，以确 定疫苗保护效果。 方法： 1利用生物信息学方法在美国疾病预防和控制中心(CDC)数据库 获GASM12血清型的基因序列，通过与人体组织基因比对选取与人无交 叉反应的特异性序列，采用搭桥PCR的方法扩增并插入F7M5序列中， 得到F7M6序列。 2在线预测F7M6序列表位。 3在线预测F7M6蛋白空间结构和亲水性分析。 血清型和M蛋白C端共同基序(J基因)的基因序列，得到M6序列。 万方数据 中文摘要 5将两段基因片段克隆至载体pET28a中，测序正确后将阳性质粒分 Westernblot鉴定。采用亲和层析纯化方法对两种蛋白进行纯化。 M蛋白，以相同剂量联 6将纯化的两种蛋白，连同本室保存的GAS 合佐剂分别免疫小鼠，腹部皮下多点注射，同时设立PBS对照组。每组