利美尼定对过表达ALS相关毒性蛋白质NSC34细胞干预的研究.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………5 研究论文利美尼定对过表达ALS相关毒性蛋白质NSC34细胞的干预研 究 —1．·￡一—j- 刚舌………………………………………………………………………9 材料与方法……………………………………………………………1O 结果……………………………………………………………………17 附图……………………………………………………………………19 讨论……………………………………………………………………23 结{沧……………………………………………………………………27 参考文献………………………………………………………………28 3 综述 自噬与肌萎缩侧索硬化症……………………………………3 致谢……………··：……………………………………………………43 个人简历……………………………………………………………………44 中文摘要 利美尼定对过表达ALS相关毒性蛋白质NSC 34细胞的千预研 究 摘 要 目的： lateral 肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophic 性累及上下运动神经元为特点的神经系统变性病，一般在成年起病，多在 起病后的3到5年因致命性呼吸衰竭死亡，目前尚无有效的治愈方法。 基因突变，这两个基因的突变可以使细胞内蛋白异常折叠和聚集，产生运 动神经元变性，从而导致ALS的发生和发展。细胞内异常形成和聚集的 蛋自主要通过自噬途径被降解。 为了寻找能应用于临床的安全自噬诱导剂，ClaudiaRose等人筛查了 美国食品药品监督局(FDA)批准上市的药品中发现利美尼定 顿病鼠模型中能够上调自噬，减少突变的亨廷顿蛋白的水平。此外，利美 34 变性死亡。因此我们为了证实利美尼定是否能够诱导自噬，降解NSC 细胞内与ALS相关的异常的毒性蛋白。我们在NSC34细胞系中应用利美尼 定，通过蛋白免疫印迹(western SODl、G93ASODl、 先来验证利美尼定是否有诱导自噬的作用。再将WT WTTDP一43、TDP．25、TDP．35质粒转染至NSC34细胞系构建ALS细胞模 型，通过蛋白免疫印迹的方法对比用药组和空白组中外源性蛋白的表达水 平。最后应用特异性自噬抑StJ齐tJ3．MA(3．methyl 美尼定是通过自噬途径降解细胞内异常聚集的蛋白。综上，我们的数据表 明利美尼定可以在ALS细胞模型中通过自噬途径清除细胞中异常的毒性 蛋白，可能达到对神经元的保护作用。这就为以后探索利美尼定在ALS 等变性疾病动物模型中保护性机制，甚至为后续变性病的临床试验研究提 供了一定的实验数据和理论基础。 中文摘要 方法： 1细胞培养及SODl、TDP．43转染NSC34细胞系的建立 NSC 34细胞系是具有很多运动神经元特性的杂交细胞系，我们用 10％灭活胎牛血清、青霉素及链霉素配制的高糖DMEM作为其培养液， 使其在37℃、含有5％二氧化碳的温箱中生长传代。我们应用 SODl、 2000转染试剂用瞬时转染的方法将E