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萌发小麦种子淀粉酶酶学性质研究 陈晓蒙 （东北农业大学生命科学学院，哈尔滨，150030） 摘要：本研究以萌发的小麦种子为材料，提取得到淀粉酶液。利用分光光度计法测定淀粉酶分解淀粉所得还原糖与3,5-二硝基水杨酸的还原产物的吸光值，从而得出酶活标准曲线。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶对温度的差异，采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测定出α-淀粉酶的活性。在非钝化条件下测定淀粉酶的总活力。将小麦分为种子、芽和整个小麦分别来测定。研究影响淀粉酶活性的因素，在不同温度、不同pH值、激活剂和抑制剂的条件下由酶反应混合物遇碘呈现的颜色判断出酶活性的的最适温度为40℃，最适pH值为5.6，NaCl为激活剂，CuSO4为抑制剂。通过研究淀粉酶的性质使我们更充分地了解，并利用于工业生产、食品加工、医疗等产业。 关键词：淀粉酶 活力 温度 PH 激活剂和抑制剂 The enzymatic properties of amylase in Wheat Seed Germination Xiaomeng Chen Northeast Agricultural University Biological Sciences1301 Zip .Code:150030 引言：酶是一种具有催化活性的蛋白质，由氨基酸通过肽链连接而成，只有在适当的温度pH和离子强度下才具有生物活性。而且生物体内的各种代谢变化都是由酶驱动的，酶既能催化各种生化反应，还能调节和控制代谢的速度、方向和途径，是新陈代谢的调节元件。淀粉酶广泛分布在植物和动物体内，特别是萌发谷物种子。它具有水解淀粉的能力，对生物有很大的影响作用。而淀粉是植物最主要的储藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。因此研究淀粉酶有重要的意义。现代酶学正向着两个方向发展：酶的分子生物学和酶工程学，它们是现代生物技术的重要组成部分，应用范围包括药学、食品、化学工业、诊断分析和生物传感器，涉及的品种不少，如淀粉酶，其市场需要生产规模和产业均很乐观，并已产生巨大经济效益。 1材料与方法 1.1材料 萌发的小麦种子（芽长约1cm） 1.2 方法 1.2.1 麦芽糖标准曲线的制作 取7支干净的具塞刻度试管，编号，1-7号试管加入麦芽糖标准溶液分别为0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.0ml，再分别加入蒸馏水2.0、1.8、1.4、1.0、0.6、0.2、0ml，使得1-7号试管中麦芽糖含量分别为0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8和2.0mg。再分别加入10g·L-13,5-二硝基水杨酸2.0ml，将各试管置于沸水浴中加热5min，取出后冷却至室温，用蒸馏水定容至20ml。用1号试管做对照组，空白调零，在520nm下，分别测定2-7号试管的吸光值A。以麦芽糖含量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 1.3.1淀粉酶活力的制备与测定 称取1g萌发的小麦种子不同部位，置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨匀浆，用6ml蒸馏水粉刺将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15—20min , 每隔数分钟搅拌一次，使其充分提取。然后在4000 r/min转速下离心10min ，将上清液倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液，用于淀粉酶活性的测定。吸取上述酶原液1ml，放入25ml容量瓶中，定容摇匀，即得到淀粉稀释液。 1.3.2α-淀粉酶活力的测定： 取3支干净试管，编号，1号加入1.0ml淀粉酶原液，置于70摄氏度水浴15min，冷却，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MNaOH溶液4.0ml，1％淀粉溶液2.0ml，在40摄氏度恒温水浴中准确保温5min，保温过后加入0.4MNaOH溶液0.0ml；2号加入1.0ml淀粉酶原液，置于70摄氏度水浴15min，冷却，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MNaOH溶液0.0ml，1％淀粉溶液2.0ml，在40摄氏度恒温水浴中准确保温5min，保温过后加入0.4MNaOH溶液4.0ml；3号加入1.0ml淀粉酶原液，置于70摄氏度水浴15min，冷却，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MNaOH溶液0.0ml，1％淀粉溶液2.0ml，在40摄氏度恒温水浴中准确保温5min，保温过后加入0.4MNaOH溶液4.0ml。 1.3.3总酶活力的测定： 取3支干净试管，编号，1号加入1.0ml酶稀释液，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MN