乳酸菌产苯乳酸分离提取的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 苯乳酸(Phenyllactic candidum中可以抑制Listeria 真菌等功能。除了在食品中具有抗微生物的功能外，苯乳酸由于是中药提取物“丹参素” 的类似物，具有一定的药用价值，因此苯乳酸的开发和利用具有广泛的应用前景。 本论文应用实验室已有的可以发酵生产苯乳酸的乳酸菌Lactobacillus sp．SK007，首 先在实验室规模下，对发酵生产苯乳酸的培养基在MRS培养基基础上进行改良，并对 发酵培养基成分进行优化；然后进行了300 L发酵罐规模的中试发酵论证实验，绘制了 发酵过程曲线，分析了发酵液的主要成分；初步找到使用薄层层析色谱的方法来快速检 测苯乳酸；在预处理的基础上，采用离子交换树脂、膜分离、溶剂萃取等方法对苯乳酸 发酵液的分离纯化进行探索性研究；系统地对活性炭吸附脱色苯乳酸发酵液进行了研 究，分析了脱色的工艺以及活性炭吸附的热力学性质。具体研究内容与结果如下： 1．以乳酸菌Lactobacillus sp．SK007作为苯乳酸的生产菌株，在单因素分析的基础 上，采用均匀设计、二次旋转组合设计等一系列优化实验，确定了最佳培养基的组成和 浓度。乳酸菌SK007发酵产苯乳酸的发酵条件为发酵温度为30℃，发酵时间24h，培 6．2—6．4，培养基成分为30 养基起始pH eeL葡萄糖，5∥L苯丙酮酸，47eeL玉米浆，3∥L 磷酸氢二钾，3 mL／L吐温．80，实验结果有良好的重现 g／L乙酸钠，30∥L酵母粉和3 性，苯乳酸产量达到2．30∥L。在苯乳酸的发酵生产中使用玉米浆作为主要氮源，而取 代了蛋白胨，由于节约了成本，提高了发酵法合成苯乳酸工业化生产的可行性。 2．进行了300 L发酵罐规模的中试发酵论证实验，根据发酵进程曲线表明，代谢产 物的生成与生长是同步的，即生长偶联型。分析了发酵液的主要成分，分别为苯乳酸 另外，对发酵液中的苯乳酸进行构型分析，结果表明发酵液中L．苯乳酸和D一苯乳酸的 比例接近于1：1。 3．采用薄层层析色谱法测定苯乳酸，其具体条件为，展开剂及比例为氯仿：甲醇： 冰醋酸=8：1：0．1，显色剂为10％硫酸的甲醇溶液和5％磷钼酸的甲醇溶液。 4．利用硫酸铝絮凝等方法先对苯乳酸发酵液进行预处理。然后考察了不同的分离纯 化手段对苯乳酸发酵液的影响，其中包括离子交换树脂、膜分离以及溶剂萃取等方法。 通过研究表明，采用乙酸乙酯萃取分离效果比较明显，通过正交实验得到最终工艺是相 回收率为92．61％。 5．研究了4种活性炭对发酵液吸附脱色的影响，最终选择ACl为脱色剂，再通过 单因素实验和正交实验对脱色条件进行优化，得到了适宜的脱色条件为：活性炭添加量 1．5％，发酵液初始pH6．5，温度为90℃，脱色时间为30min。在此条件下进行进一步 实验，结果发现，苯乳酸发酵液的脱色率可达到90．48％，苯乳酸回收率为88．58％。活 摘要 kJ／mol， k．1／mol，吸附自由能△G为．6．98—10．69 0．9656)方程。吸附焓埘为-2．45一．26 吸附熵丛为12．6__42．3J／mol·K。活性炭对苯乳酸发酵液中色素的吸附是自发进行的。 关键词：苯乳酸；Lactobacillus sp．SK007；优化；分离纯化；薄层层析；脱色；吸附 Abstract Abstract anovelantim