农杆菌介导棉花传转化及转phya植株的获得.pdfVIP

摘要 本研究以优良的陆地棉品种冀无2031、中521和农大94．7为受体材料，利用 农杆菌介导的方法，将含有根特异性表达启动子的phyA基因转入供试品种的下胚 轴中，利用正交设计方法优化了农杆菌侵染棉花下胚轴的转化条件，并获得抗性 愈伤组织：将，西州基因导入珂312和珂201的胚性愈伤组织中，芬得了经PCR 检测的转基因植株；以珂312、中521和农大94．7的茎尖分生组织为受体，获得． 了含phyA基因的T2代植株，进一步对转基因植株的后代进行根系植酸酶活性分 析，为棉花现代分子育种增添新的内容和新的种质材料，同时为农作物有效利用 土壤有机磷资源开辟一条经济有效的途径。主要研究结果如下： 1．通过正交设计方法，研究了农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化过程中菌液浓 度、侵染时间、共培养时间和共培养温度对抗性愈伤转化效率的影响。结果表 明，四个因素均对抗性愈伤的诱导率有极显著影响，其诱导效应依次是共培 养温度，菌液OD值侵染时问)共培养时问。按照正义设计的原则，最终得至0 5min， 农杆菌介导转化棉花下胚轴的最佳条件是：菌液OD值为0．3，侵染1 24 oC共培养24h。研究了卡那霉素(Km)对棉花愈伤组织诱导和生长的影响， 结果表明，不同的品种对Km的敏感性不同，中521愈伤组织的筛选压为150 mg／L，冀无2031和农大94．7愈伤组织的筛选压为100m∥L。 2．利用优化的条件，以珂312、中521和农大94．7的茎尖分生组织为受体，获得 了含phyA基因后代植株，Southern杂交证实外源基因已整合到棉花基因组中。 系活性分析表明Tl代和T2代单株根系分泌活性都明显高于未转化的对照单 株，是对照的1．32-7．76倍。 了经PCR检测的转基因桓株。 关键词：棉花；农杆菌介导转化；植酸酶基因；植酸酶活性 GeneticTransformationof Agrobacterium·mediated CottonandProductionof Plantswith Gene Transgenic PhyA Author：Zhao Changyan Geneticsand Major：Crop Breeding Supervisor：Prof．MaZhiying Prof．WangXingfen Abstract This usedthe cottonCV．CCRl52 1 and as study upland 1，Jiwu203 Nongda94．7 materialsand transformedthe vector the target into of expressionphyAgene hypocotyls thesevarietiesvia transformation Agrobactetium—mediated，and conditi