牛乳β-乳球蛋构象性表位定位及结构特征研究.pdfVIP

摘要 摘要 牛乳过敏是严重食物过敏之一，其中在1岁新生儿的发生率可以达到2．2％ 到2．8％。牛乳中含有20多种蛋白，其中p．乳球蛋白是牛乳中主要过敏原之一， 约82％的牛乳过敏患者对B哥L球蛋白过敏。另外，过敏原表位包括线性和构象 性表位，它们是过敏反应的物质基础。相对于线性表位，人们对构象性表位的认 知严重不足。毫无疑问，牛乳p．乳球蛋白构象性表位的研究具有重要意义。 本论文工作包括抗牛乳B．乳球蛋白特异性IgE的纯化，噬菌体展示技术淘选 特异性模拟肽，生物信息学模拟构象性表位、构象性表位氨基酸的结构特征。研 究的主要方法结果及结论如下： 4B亲和柱和ProteinG亲 1．以牛乳过敏患者的血清为样品，通过Sepharose 和柱，逐步纯化患者血清中特异性IgE抗体，建立了两步法纯化抗牛乳p．乳球蛋 白特异性IgE的方法。选择ELISA法检测纯化后IgE的纯度，所得特异性抗体 纯度较高，而ELISA结果同时显示IgE抗体经纯化后仍然保持了与牛乳B一乳球 蛋白较高的结合能力。 2．采用亲和淘选的方式，以纯化的抗牛乳p哥L球蛋白特异性IgE为靶分子， 经过3轮淘选，随机挑选32个克隆子，进行测序鉴定，得到了三个模拟肽的核 3．将牛乳p．乳球蛋白的结构和模拟肽序列输入到网络服务器Pepitope中， 通过比对模拟肽的参数，成功地将模拟肽转换成了牛乳B．乳球蛋白的3个构象性 10，B：Ile2． 其可信度依次为ABC。 p-乳球蛋白构象性表位氨基酸结构特征，它们主要是极性氨基酸。与预测的牛乳 p一乳球蛋白的亲水性、表面可及性以及抗原性对照，发现3个构象性表位的18 个氨基酸中，4个氨基酸处于亲水性区域中，2个位于表面可及性区域中，7个 在抗原性区域中。与预测的牛乳p-乳球蛋8-级结构为参照，构象性表位氨基酸 所在的的区域分布为：0【一螺旋7个氨基酸，折叠区域6个氨基酸，无规则卷曲区 域5个氨基酸。但通过模拟肽在牛乳p．乳球蛋白三维结构中定位出的3个构象性 表位，它们分布则为：折叠区域有8个氨基酸，转角区域有2个氨基酸，无规则 卷曲区域有8个氨基酸。 摘要 关键词：牛乳过敏；噬菌体展示；牛乳p-乳球蛋白；IgE；构象性表位；表位· II ABSTRACT ABSTRACT Milk isone allergy ofthemostseriousfood allergyproblem，and general birthcohorts acowmilk population of reported 2．2％to2．8％at1 allergyprevalence of aremorethan20 yearage-There in is proteins one ofthemain about 82％ofmilk allergens，and are tobovin