牛乳产蛋白酶菌离鉴定及产酶条件的研究.pdfVIP

摘 要 试验从呼市地区鲜牛乳中分离得到65株蛋白酶生产菌，从中筛选出产蛋白酶较 高的3株菌进行生理生化鉴定，同时对其产酶条件及发酵工艺进行优化。最终选出 高产蛋白酶且具稳定性的菌株进行分子鉴定、酶学性质研究及通过诱变处理进一步 提高产蛋白酶能力。 产蛋白酶较高较稳定的三株菌Bs4、Bsl5、Bs2917通过生理生化试验鉴定为枯草 芽孢杆菌。对产蛋白酶最高且稳定的Bs4菌株进行形态特征观察、生理生化试验和 16S rDNA序列分析结果表明为枯草芽孢杆菌。其中Bs4菌株的最佳培养条件：温度为 株的最佳培养条件：温度为32℃、pH7．5、培养时间为36h、接种量为3％．酶活力可 h、接种量为3％，酶活力可达至n1367．57U／mL。 通过单因素试验和正交试验可知Bs4菌株最优培养基配方为：玉米粉33．49／L， 麸皮33．49／L，豆饼粉30．89／L，(NH4)：HPO。／KH：PO。12．09g／L，经37℃，36h培养 得菌株酶活力为1390．79U／mL。 对菌株Bs4进行酶学性质研究发现酶最适作用温度为57℃，最适pH为7．0．该 保留40％的酶活力，超过50℃稳定性下降，70℃，20mil3酶活力全部丧失：-Ⅵg’、 ca2+、K‘对酶有一定的激活作用和稳定作用，Zn2、+Fep对酶有一定的抑制作用。 对菌株Bs4进行了紫外、微波、亚硝酸盐等单因子诱变处理，得到突变菌株 UB—12产酶活力为3014U／mL，其出发菌产酶活力提高了40％左右。该菌株经遗传 稳定性试验可知产酶水平稳定，为工业化生产酶制剂提供了优良菌株。 关键词：枯草芽孢杆菌：中性蛋白酶：16SrDNA；培养基优化：酶学性质；诱变处理 identificationand onisolationand Sutdy fromMilk conditionsof Srtains Proteinase··Producing Abstract． bacteriawere fromthefleshmilk 65strainsof producer separated among proteinase more selectedtodosome and which3 Proteinase，were physiology strains，produce about and theircondition biochemistry optimize producingproteinase． experiments wereselectedtO strainswhichcan mostProteinase study Finally，the produce their about anddo inordertoelevateability producing enzymologymutagenize proteinase． l5andBs2917their and about Bs4、Bs stationaryp