牛乳蛋白质检测术的研究.pdfVIP

牛乳蛋白质检测技术的研究 摘要 乳制品安全的核心问题是乳源蛋白质的检测。本课题研究比较 了凯氏定氮法(Kjeldahl)和四种分光光度法对牛乳与其模拟掺假样 中蛋白质的定量检测，并应用十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳 进行分离分析。 牛乳蛋白含量的凯氏定氮法测定，以牛乳及掺入不同浓度的尿 素及三聚氰胺为样品，凯氏定氮法结合三氯乙酸沉淀确定牛乳蛋白 质的理论值，含不同量尿素样品的蛋白测定值的误差率小于3．54％、 相对标准偏差(RSD)小于1．93％，该类样品中蛋白含量和理论值没 有显著性差异，P值大于O．05；而掺入不同量三聚氰胺样品中蛋白测 定值和理论值存在显著性差异，P值小于0．05，且随着掺假比例的增 高，误差率不断增大。可见，凯氏定氮法能准确检测到牛乳与掺入 尿素牛乳的蛋白量，但对掺入三聚氰胺牛乳的蛋白量难以准确检测。 牛乳蛋白含量的分光光度法测定，以凯氏定氮法测定的牛乳蛋 考马斯亮蓝法(Bradford)和4，47．二羧基一2，27．联喹啉法(BCA)， 对掺假牛乳进行检测，其中考马斯亮蓝法不能准确测定牛乳蛋白质 含量，在牛乳中掺入尿素和三聚氰胺的检测中误差率均大于21．56％ 和20．4％，且P值小于0．05。双缩脲比色法，福林酚法和4，4’。二 羧基．2，27．联喹啉法能准确检测牛乳蛋白质含量。这三种方法在检 测牛乳中掺入尿素和三聚氰胺的样品时误差率依次为：双缩脲比色 7一二羧 法小于2．99％和1．55％、福林酚法小于2．99％和2．04％、4，4 基．2，27．联喹啉法小于3．13％和1．54％；且三种方法的P值大于O．05， 实测值和理论值没有显著性差异。结果表明，除考马斯亮蓝法外， 其它三种方法均能真实的测定出牛乳中掺入尿素和三聚氰胺时的蛋 白含量。 牛乳及掺假乳中蛋白质的十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳 2．5％、浓缩胶浓 (SDS．PAGE)分析技术研究。确定分离胶浓度为1 度为3％的不连续垂直稳流电泳，实验可以得到较好的乳蛋白分离分 析图谱。对牛乳中掺入不同浓度大豆蛋白粉、明胶和乳清粉分别用 SDS．PAGE电泳检测，应用凝胶图像分析软件分析电泳图谱，结果 表明SDS．PAGE可以检测牛乳中掺入的乳源蛋白质(乳清粉)和异 源蛋白质(明胶、大豆蛋白粉)，其检出限分别为4．4mg／mL、O．87 mg／mL。 mg／mL和O．79 牛乳及掺假乳中蛋白的高效毛细管电泳分析应用研究。毛细管 电泳条件为未涂层的熔融石英毛细管，磷酸盐缓冲液(pH=2．5)，柱温 3 14 5℃，分离电压26kV，紫外检测波长2nm，在30min内可以实 现牛乳及掺假牛乳中蛋白质的分离，5种主要乳蛋白在不同线性范围 内的线性相关系数均大于0．997，各乳蛋白的迁移时间和峰面积的 RSD分别小于O．34％和4．65％。通过牛乳混样与不同比例的掺假乳 (大豆分离蛋白，明胶，乳清蛋白)比较分析，可以确定出掺假蛋 白的特征峰，可用于定性测定，样品掺入30％的大豆分离蛋白、明 胶、乳清粉溶液通过峰面积可以计算牛乳中掺假蛋白的添加量分别 为O．98 mg／mL、1．61mg／mL、O．68mg／mL。 通过对牛乳与掺假乳样中蛋白质的定量检测多种方法的比较分 析研究，为乳品非蛋白质掺假定量分析提供了指导； SDS．PAGE和 毛细管电泳能实现蛋白质的精细分离，是乳品掺入非乳源蛋白分析 的重要技术方法，牛乳蛋白质定性定量分析是保障乳品营养安全的 关键。 关键词：凯氏定氮法，分光光度法，聚丙烯酰胺凝胶电泳，毛细管 电泳，牛乳蛋白质 Ⅱ RESEARCHoNDETECTIoNTE CHNIQUE OFMILKPRoTEIN ABSTRACT The milk de