苹果茎沟病毒和绿叶斑病毒分子变异研究.pdfVIP

摘 要 stem grooving 苹果茎沟病毒(Apple cholortotic leafspot 果树的生长、产量、果品质量等造成严重的影响。本研究以ASGV和ACLSV为对 象研究其生物学、血清学特性和分子变异。目的就是要通过对不同来源分离物的分 子变异与生物学和血清学特性的比较分析，从分子水平上探索ASGV和ACLSV生 物学多样性和血清学差异与分子变异的关系，结果如下： 得ASGV23个分离物。采用TC．RT-PCR对这些分离物进行扩增，均获得特异 种迁移率不同的泳动带型。根据PCR产物电泳迁移率的差异，选取3个来源于 酸序列同源性分别为92．2％、90．4％和88．4％。3个分离物间的核苷酸序列也有 较大差异，P．U佃…61 为88．6％。 2．选取生物学和血清学特性上存在较大差异的ASGV梨分离物P．6．1．17、P…4169、 P—L2和P-D一21，采用RT-PCR法对37端进行扩增，所获扩增片段经序Y0j9】,fJ定， 物的CP基因均由714nt组成，其核苷酸和推导编码蛋白氮基酸序列同源性分别 分离物及分子变种进行序列同源性比较和系统进化树分析，结果表明我国ASGV 分离物至少可分为2个组群，其中生物学表现明显不同于其它分离物的P．L2， 其CP基因核苷酸序列显示较大的变异。 3．通过昆诺藜接种鉴定和ELISA检测，从梨、苹果和桃上获得ACLSV13个分离 和PE·5 均能获得特异的358bp目标片段。 4． 在昆诺藜和苋色藜上均产生系统褪绿症状，且血清学上相关的来源于桃和苹果 分离物进行序列同源性比较和系统进化树分析结果表明，HBP与从苹果和樱桃 4 上分离的ACLSV分离物制备的单克隆和多克隆抗体无血清学关系(或很弱)的 采源予法藤李戆SX／2熬鄹灞莛缀凑，且滚缘关系缀近袁遴琵树中癌蔻一缝。 S硌C 获褥485m3’越CP基嚣警裂。P-4-l-69、I-IBP释ACl3令分塞兹瘸熬核营 酸和编码骚自氨基酸序列同源性分别为86．2％～99．8％和96．2％～100．O％。将我国 3个分离携靛3+鲻CP基瓣与邑缀遂ACLSV分离镌送行窿列霹澈姓跑较鞠系统 5个分离物位于2个不露的坦群。 6．HBP外壳蛋白基因在大肠杆菌中获得袭达，融合蛋白大小约为47．6kDa。 Western．blot检测装明该基因在大肠杆菌内正确表达，融会蛋白具有抗原性。 关键词：苹果莲沟病簿，苹果褪绿叶邂病毒，变异，步}壳蛋融。原核袭达 Abstract The stem cholortotic apple groovingvirus(ASGV)andapple leafspot in whichcancausesereious viruses and trees virus(ACLSV)areimportant applepear fruit．The effectonthe offruittreesandthe of growth quantity,quality of and of andACLSVwere inthisreaserch．Theaim molecular ASGV studied