热凝胶多糖（crdlan）生产工艺及其分子结构的研究.pdf

中文摘要 热凝胶多糖(Curdlan，又名可德兰)是由细菌发酵生产的胞外直链无分 枝B．(1，3)．D．葡聚糖，因其特定的热凝胶性和独特的分子结构而在食品、 轻：[、医药、保健等领域有广泛的应用开发价值。本文从诱变筛选高性能生 产菌株着手，研究了Curdlan的发酵特性，优化了发酵培养基的组成和发酵 培养条件，分析了Curdlan间歇发酵过程中发酵液的流变学特性及气液传质 离和纯化工艺，对Curdlan样品的分子结构及其改性进行了探索研究。主要 的研究结果如下； 1．利用”Co 表明，适当剂量的”Co 体均有较好的正突变诱变作用，而对原生质体的诱变效果尤为明显，原生质 体经”CoY辐射后，其正突变率、最优突变株的多糖产量提高幅度、突变株 的遗传稳定性都高于菌体细胞，尚未发现国内外有相关豹文献报导。 与出发菌株GM．24相比，最终选得的原生质体突变株A38的生产性能有 g。一 上升到22．3 g．L～，提高了50．4％，发酵周期时间缩短了18％。A38的遗传 性能稳定，连续翻接5代后发酵性能维持良好，。 2．对菌株A38的底物组分单因素实验表明，葡萄糖、蔗糖、糖蜜和可溶 性淀粉作为发酵的碳源都可以生产Curdlan，但以葡萄糖为最佳碳源，酵母 粉为最佳氮源，适量的碳酸钙不仅可以促进Curdlan的发酵生产，而且能够 维持发酵液的pH的稳定。 正交实验表明氮源对Curdlan产物得率的影响最显著，碳源影响显著， 嘧啶对Curdlan发酵的影响比柠檬酸钾明显。 酵母粉7．64，尿嘧啶O．32，KH2P040。22， 2．0， 产量为26，329．L～，比培养基优化前提高了18％。 期后开始生产。 3．发酵条件的单因素实验表明，发酵种子液的适宜种龄为10h，接种量 溶氧 V 剂PPE和菜油有助于改善发酵液的溶氧水平，适宜的发酵温度为30～32℃， 2—6．0，发酵周期为72h左右。 培养基初始pH为7．0，产胶阶段pH为5 应用响应面设计(RSkI)优化的Curdlan发酵的培养条件为：种龄99h， 的发酵多糖产量为29．889．L～，比培养条件优化之前提高了13．6％。 3．7L自动发酵罐实验表明以优化的培养基和培养条件进行分批发酵，考 察罐发酵过程中Curdlan浓度与发酵液粘度的变化趋势，首次得到用发酵液粘 度预测Curdlan产量浓度的模型方程。 液在平衡期阶段由牛顿型流体转为假塑性流体，流体流变特性趋于复杂，发 酵过程的溶氧传质机制好坏，主要取决于反应器搅拌转速的影响。具体反映 在： (1)搅拌转速在600r／min以内时，搅拌转速越高，菌体的生长速率越 快，最终细胞干重越大，细胞产率也较高，但发酵周期却基本相同。 的得率系数变化也呈相同的变化趋势。 时是63500Da，至Ⅱ900r／min时则只有26500Da。 (4)适当的高搅拌转速(600r／min)下，发酵体系处于良好的搅拌状态， 前期有效体积为100％，到产糖最高时(60h)也有86％。而低转速搅拌时， 有效体积随着发酵时间的推进不断下降，Curdlan合成的产量也明显降低。 Curdlan传氧系数kLa是生物反应系统中的一个限制性因素，搅拌转速和 kLa之间几乎成正比关系，Curdlan浓度的增高也明显降低了气体在溶液中的 kLa值。 5．用Logi 物合成动力学规律，并据发酵过程中的底物消耗主要用于菌体生长与产物合 成及相关的代谢规律， 首次对分批发酵动力学进行了初步探索，得到其发酵 动力学方程为： (1)菌体生长动力学方程 x=丽0． 972慧3+0． u1)M 0277e (2)胞外多糖生成动力学方程 Vl (3)底物消耗动力学方程 以上方程的计算值和实验值均能较好拟合，平均误差在lO％以内。 6经过对Curdlan粗多糖多种提取工