酶活力测定法.pptVIP

生物药物和基因工程药物分析简介 酶法 一种是以酶为分析对象的分析，即“酶活力测定法”，测定样品中某种酶的活力或活性。 另一种是以酶为分析工具或分析试剂的分析方法，即“酶分析法”，用酶作试剂测定样品中酶以外的其他物质的含量。 酶活力测定法 1. 基本概念： 测定一个被酶所催化的化学反应速度，酶反应速度可以用单位时间反应底物的减少或产物的增加来表示。 酶单位的定义：任何一种酶，系指在25℃以最适当的底物浓度、最适当的缓冲液离子强度以及最适当的PH等条件下，每分钟能转化一微摩尔底物的酶量定为一个活性单位（IU）。 酶分子活力的定义：每微摩尔酶对最适当底物的活性单位也即每个酶分子每分钟转化底物的分子量。 2. 酶促反应的条件及影响因素： 底物浓度、pH、温度、辅助因子和空白对照。 3. 测定方法 ： 有取样测定法和连续测定法 取样测定法：在酶反应开始后不同的时间，从反应系统中取出一定量的反应液，并用适当的方法停止其反应后，再根据底物和产物在化学性质上的差异，采用适当的检测方法进行定量分析，求得单位时间内酶促反应变化量的方法。 连续测定法：基于底物和产物在理化性质上的不同，在反应过程中对反应系统进行直接连续检测的方法。 4. 酶活力测定的检测方法 采用紫外-可见分光光度法、荧光分光光度法、旋光度法、酶偶联测定法、电化学测定法、离子选择性电极测定法、放射化学法等。 酶分析法 以酶为分析工具的分析方法。分析的对象是酶的底物、辅酶活化剂甚至没的抑制剂。有两种分析方法：总变量分析法、动力学分析法。 总变量分析法，又称平衡法或终点法，在反应完成后，借助理化方法测出其总变化量，并参考反应的平衡点，计算被测物的实际含量或浓度的一种分析方法，仅适用于底物的测定。 动力学分析法，通过条件控制，分别使底物、辅酶活化剂或抑制剂的浓度在酶反应中起决定反应速度的主导作用，通过酶反应速度和上述相应因素的浓度间的比例关系求出浓度。 电泳法 操作简便、灵敏度高、重现性好、检测范围广。 根据电泳分离特点，可分为：1.自由界面电泳2.区带电泳3.高效毛细管电泳 免疫测定法 通过抗原抗体反应定量检测抗体或抗原性物质的方法。 生物检定法 利用药物对生物体的作用以测定其含量、效价或生物活性的一种方法。 1. 生物药物含量的测定 适用于理化方法不能测定其含量或理化测定不能反应生物活性的药物。 2. 大分子结构的测定 适用于分子量大，结构复杂、类似，很难用理化方法区分的生物制品 3. 微量生理活性物质的测定 此类物质生理活性强，在体内浓度低，加上体液中各种物质的干扰，很难用理化方法测定，故用此法测定。 由于生物差异，生物检定结果存在误差较大，重现性较差，测定费时等问题，故此法主要用于无适当理化方法进行测定的药物，许多生物药物是综合运用多种方法进行质量控制。