一氧化氮对猪卵颗粒细胞凋亡和卵母细胞成熟的影响.pdfVIP

摘要 一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种气体自由基，广泛存在于各组织器官的各 种细胞中，参与循环系统、神经系统、消化系统、呼吸系统和免疫系统等多种生理 和病理过程。在雌性生殖系统中，NO参与卵泡的发育、卵母细胞的成熟、排卵、 黄体退化、受精、胚胎着床、维持妊娠、调节分娩、月经周期的调控等一系列生殖 过程。NO对颗粒细胞作用的研究主要集中在鼠(包括人)上，在其他动物上报道 不多。本论文以猪为对象，研究了NO对颗粒细胞凋亡和细胞周期的影响，对卵母 细胞成熟及发育能力的影响，以及与激素的相互调节的作用。用不同浓度的NO供 体硝普钠(sodium 颗粒细胞和卵丘卵母细胞复合体(COCs)。培养结束后，观察细胞的形态，检测细 胞的凋亡、细胞周期和培养液中的激素含量，检查卵母细胞的成熟率并孤雌激活后 观察胚胎的发育情况。结果发现，0．01mMSNP对培养细胞的生长形态没有影响， 0．1mM和lmMSNP能促使贴壁的细胞收缩，且形态不规则，促使培养后消化的细 胞表面粗糙，细胞膜呈现出许多小泡状突起。0．01mMSNP可降低2mm和4mm卵 泡壁颗粒细胞的凋亡率，对卵丘细胞的凋亡没有影响。0．1mM和lmM促进了2mm 和4mm卵泡壁颗粒细胞和卵丘细胞凋亡。NO对不同细胞类型和壁颗粒细胞的不同 发育阶段凋亡的影响不一样：卵丘细胞凋亡率低于2mm壁颗粒细胞(P．O．05)，2mm 壁颗粒细胞凋亡率低于4mm壁颗粒细胞(p(o．05)。lmMsNP对凋亡作用最明显 比对照组高出42个百分点，在卵丘细胞其凋亡率达到9％，比对照组降低8个百分 点。SNP能剂量依赖性降低2mm,4mm卵泡壁颗粒细胞和卵丘细胞G0／G1期细胞， 到lmM的3l％，但0．01mM在4mm卵泡壁颗粒细胞和卵丘细胞与对照组相比， 0．1mM和lmMSNP能抑制2mm和4mm卵泡壁颗粒细胞雌二醇的分泌作用 (po．05)。lmMSNP能抑制2mm和4mm卵泡壁颗粒细胞孕酮的分泌作用 (po．05)。与对照组相比，0．01raMSNP提高了受冷刺激的卵母细胞的成熟率 组降低了卵母细胞的成熟率和孤雌胚的卵裂率，这两组的胚胎没有发育到桑囊胚 的。 以上结果表明，猪卵巢上卵泡内颗粒细胞体外培养时，NO会影响颗粒细胞的 形态、凋亡、细胞周期和类固醇激素的分泌，且作用随着NO水平的变化表现出很 大的差异。高浓度的NO使颗粒细胞的形态发生异常，低水平NO则不会；高水平 的NO促进颗粒细胞的凋亡，低水平则有抑制作用；NO还能剂量依赖性地降低 G0／G1期颗粒细胞的比例，增加s期和G2／M期的比率；高浓度的NO抑制颗粒细 胞分泌雌二醇和孕酮；高浓度的NO会对卵泡内卵母细胞产生明显的损伤。对于直 径2mm和4mm的卵泡内的颗粒细胞，NO的上述作用基本相近。 关键词：一氧化氮，颗粒细胞，凋亡，卵母细胞 n Abstract Nitric free in oxide a radical．It cellof fNo)is gas presentsmany manytissues， in and of participatesmanyphysiological processes pathophysioiogiealmanysystems includingreeirculatingsystem,nervoussystem，digestivesystem,respiratorysystem, andimmune isalso involvedinfemale apparatussystem system．NOclosely mammalian reproductive asfollicleand l