一种哺乳动物性特异表达基因的克隆及组织细胞定位的初步研究.pdfVIP

一种哺乳动物性腺特异表达基因的克隆 及组织细胞定位的初步研究 摘要 本论文旨在研究一种哺乳动物性腺特异表达基因一GSE (Gonad—SpecificExpressionGene，GSE)和其在睾丸组织中的定位。论文共分 为两部分：第一部分为文献综述部分；第二部分包括第二章和第三章，为 试验研究部分。 第二章的研究目的是通过对广西本地水牛GSE基因及3’端序列进行克 隆和分析，为进一步研究水牛GSE基因的功能打下基础。根据小鼠GSE基 分析，设计一对扩增水牛GSE基因保守区序列的引物。然后以成年水牛睾 丸总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出长度为396 bp的水牛GSE基 因保守区序列。扩增产物经纯化后，连接至pMDl8．T载体上进行测序。结 果显示，该片段与小鼠GSE基因的覆盖区同源性为76％。再根据所得到 的这段已知序列设计一条上游引物，通过3’RACE的方法扩增水牛GSE基 因的3’端序列，结果得到42_bp的3’非编码区。将该片段与先前扩增得 到的序列拼接后得到了一段长度为700 bp的片段，这也是目前得到的水牛 GSE蛋白进行分析发现，水牛GSE基因所编码的多肽链中含有一个具有 构说明，GSE蛋白很可能在磷酸化和去磷酸化方面具有生物活性。 第三章的研究目的是通过组织原位杂交的方法，确定水牛GSE基因在 睾丸中确切的表达部位，从而进一步了解该基因在配子发生中的作用。用 扩增得到的水牛GSE基因序列作为模板，制备用于组织原位杂交的地高辛 标记的cDNA探针，并经过效率检测和斑点杂交检测后确定可用于组织原 位杂交。最后，将制备好cDNA探针与成年水牛睾丸石蜡切片进行组织原 位杂交，结果发现，在成年水牛睾丸曲细精管的基底室出现了杂交信号， 近腔端和曲细精管的管腔中几乎无杂交信号。通过与睾丸曲细精管上皮的 细胞组成相结合进行分析发现，水牛GSE基因应该是在初级精母细胞中大 量表达的。由于初级精母细胞正处于减数分裂时期，在这些细胞中有GSE 基因的表达，说明该基因很可能与减数分裂有关。 关键词：水牛GSE基因3’RACE探针组织原位杂交 II PRIⅣD刺STUDYCLONINGAND ON LOCALIZATIoNOFM蝴MAI。IANGONAD OFONEⅪND SPECIFICEXPRESSIONGENE to kind Thisthesisstudiesissuesrelateda ofmammalian gonadspecific it’S expression gene——GSEgene(Gonad-SpecificExpressionGene)and subcellularlocalizationintestis．Itcontainstwo Iisreviewthe parts：part IIincludes IIand are HI，which literatures；partchapter chapter experimental works． The ofthis in 11wastocloneand the objectivestudychapter