家猪印记基因rsgrfl的鉴定及在不同组织中表达量的差异.pdfVIP

AnhuiAgriculturalUniversity TheidentificationofporcineimprintinggenesRasgrf1andthe itsexpressionindifferentorganizations Answerer： Liu Liyuan AdvisorProfessor： Zhou Jie CooperationAdvisorProfessor： Yin Zongjun Major： Basic Veterinary Science ResearchDirection： Animal Physiology and Biochemistry Institute： College of Animal Science Technology AnswerCommitteeChairman： QiKezong MAY2014 万方数据 本课题由以下项目资助 国家自然科学基金项目：“阈性状基因组育种值(gEBV)估计的 叶斯方法” 国家自然科学基金项目：“脂联素对猪脂肪沉积和脂肪-肌肉相互 作用的影响” 国家农业科学技术转化基金项目：“优质高繁殖力圩猪新品系良 种扩繁与杂交利用”（2011GB2C300017） 万方数据 万方数据 摘 要 基因组印记是一种表观遗传现象，印记基因具有单等位表达和亲本特异性。通过 每个染色体的印记可以对其亲本来源进行判断。然而印记标记的机制研究表明，DNA 甲基化在基因组印记现象中起重要作用，因此甲基化动态和印记机制成为研究热点。 大部分印记基因成簇存在，绝缘子调控模型或长链非编码RNAs调控模型对其表达进 行调控。越来越多的证据表明DNA 甲基化不仅仅与印记基因表达相关，同时，印记 基因的表达调控还与翻译后组蛋白修饰有关。 目前，对基因组印记的研究主要集中在人和小鼠中，在家畜，特别是猪的研究较 少。因此在猪鉴定印记基因对于基因组印记在物种间的保守性研究具有重要意义。此 外，家畜大多数印记基因是调控生长发育的主效基因，这些基因对胚胎早期发育、出 生后的生长速度、产肉量、瘦肉率、饲料效率等数量性状有极大影响。基于印记基因 在生长和发育中的重要调控作用，鉴定出猪新的印记基因是一个值得探讨的新课题。 本研究主要进行了以下三个方面的工作： (1)利用巴克夏猪×皖南黑猪和皖南黑猪×巴克夏猪正反交模型，通过 RT-PCR-RFLP方法分析和PCR产物克隆测序法检测 “表达的SNP”，鉴定了猪候选 印记基因——Ras特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子 （Rasgrf1）基因的印记状态，及其 与其他物种间的保守性。 (2)Rasgrf1基因转录水平和翻译水平的检测。 (3)针对猪Rasgrf1基因具有组织特异性的印记表达现象，初步探索该基因在猪中 的印记机制。 结果如下： 1. 猪Rasgrf1基因的印记状态和表达模式。Rasgrf1在小鼠上鉴定为印记基因， 在家猪中Rasgrf1序列以及印记状态未曾报道过。本试验得到猪Rasgrf1基因的部分 序列，鉴定了该基因的印记状态和表达模式，克隆了该基因第 和第 14外显子的保 守序列 （分别为228bp 和 193bp），检测到第 14外显子G/A突变。以Rasgrf1基因 SNP F Rasgrf1 为杂合子的 代为对象，检测了