家蚕dpp基因克隆和表达研究.pdfVIP

摘要 家蚕dpp基因的克隆和表达研究 特种经济动物饲养专业硕士研究生 钱平 指导教师 鲁成教授 摘 要 Dpp基因是昆虫发育过程中的关键基因，最早在果蝇中发现并进行研究。目前，果蝇dpp 基因的功能已经研究的比较清楚。在果蝇胚胎发育初期，却r基因编码的蛋白参与胚胎背．腹 轴的分化。之后在胚胎体节分化的过程中指导胚胎体节间隔的形成，并作为胚胎发育基因 wingless和hedgehog的下游基因，决定将来附属肢的发育位置，包括翅、腿和触角。另外， dpp编码一种器官形成素因子，指导果蝇翅膀的形成在眼睛发育过程中指导果蝇复眼视网膜的 形成。 Dpp基因在物种间具有广泛的保守性。在果蝇中发现之后陆续在其他昆虫、线虫、爪蟾、 低等真核生物，乃至高等哺乳动物中发现其同源基因。我们在家蚕基因组数据分析中也发现 了dpp的同源基因。家蚕是重要的模式生物之一，其胚胎发育研究具有重要意义。为了研究 家蚕的胚胎发育调控机制，本论文对家蚕中dpp的同源基因进行了初步的研究， 本研究的内容与结果如下： 全长1437 dpp蛋白质的氨基酸序列相似性达到45％，将mRNA序列与家蚕基因组序列比较表明，Bmdpp 在5’端有选择性剪切，两种剪切形式的mRNA都由2个外显子和1个内含子组成，且所有 的外显子，内含子拼接边界均符合经典的GT-AG规则。 (2)为了研究Bmdpp基因在家蚕各组织和各个发育时期的表达情况，以家蚕脂肪体、丝 腺、中肠、体壁、头部、精巢、卵巢cDNA和从未受精卵到受精8天的不同胚胎发育时期的 卵为模板进行RT-PCR扩增。RT-PCR结果表明Bmdpp基因在所检测的家蚕各组织均有表达； 在对不同胚胎发育时期表达情况的调查发现，Bmdpp在绝大部分时期都高量表达，在受精 6h-14h表达量很低，甚至没有表达。这一表达模式和果蝇dpp基因在胚胎发育过程中的表达 I 两南大学硕十学伊论文 模式相似，推测Bmdpp在家蚕早期胚胎发育背．腹轴的分化中起作_}}I。 构建成重组表达质粒，转化至USL21表达菌株，挑取单克隆先在2432下振荡培养，当OD值达到 0．6时加入终浓度为1mM的IPTG，在37C 的菌和未诱导的转化菌为对照，经SDS．PAGE电泳诱导菌出现约40Io的目的蛋白带，说明该 基因编码的蛋白得到表达。 关键词：家蚕胚胎发育体节基因dpp II ABSTRACT Gene and of in Bmdpp CloningExpression mori Silkworm，Bombyx Animals The Of Economic Masterof BreedingSpecial Ping QIAN Prof．LU Supervisor Cheng ABSTRACT functionhasbeen a rolesinthe ofinsects．Its Dppgeneplaypivotal