小麦族物物α-溶蛋白基因的克隆与分子进化研究.pdfVIP

摘要 摘要 麦(Hordeum vulgate)、黑麦、燕麦、玉米、高粱等重要的粮食作物。它们的种 子构成了人类和动物的主要食物。其中，禾谷类植物种子的主要蛋白营养成分称 作醇蛋白(prolamins)，它们富含基因家系组成，这些蛋白多能溶解于乙醇中。在 小麦族植物种子蛋白中，麦醇溶蛋白(Gliadin)是小麦胚乳贮藏蛋白的重要组成 部分之一，其组成和含量对小麦烘烤品质具有重要作用。麦醇溶蛋白在较低的PH 值条件下，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，按电泳迁移率的不同，可以分离成为Q、 B、1，和仿四种类型。麦醇溶蛋白的等位性变异在栽培小麦及其近缘属物种中极为丰 富，已经被用在小麦遗传资源的鉴定之中。 醇溶蛋白基因在结构上具有一定的保守性，并且a醇溶蛋白基因编码的氨基酸 序列包括信号肽、多聚谷胺酰胺区域、重复区和非重复区，以及有利于蛋白质形 成二硫键的6个半胱氨酸残基等典型的特征，为进行醇溶蛋白基因的克隆和从基因 序列水平上来阐释其遗传变异的分子机制提供了依据。 aestivum，AABBDD)、四倍体硬粒小麦 目前已有从六倍体普通小麦(Triticum (Zdurum，AABB)、斯卑尔脱小麦(T spe／ta，AABBDD)、栽培小麦的A、B、 D染色体供体物种一粒小麦(Z 的报道，但是未见在小麦族植物其他物种的系统研究。 本研究从小麦育种应用中广泛优异的近缘种属出发，率先开展了簇毛麦属 和小麦．山羊草复合群(Triticum-Aegilopscomplex)的20余个二倍体或多倍体代表 性物种的洳醇溶蛋白的序列进行了克隆与序列分析，获得了以下创新性结果： (1)在黑麦属物种中，我们率先在野生黑麦中克隆到10个小麦Q．醇溶蛋白 的类似序列，通过聚类与系统发育树分析发现这些存在于森林黑麦(＆sylivestre) 和非洲黑麦(africanum)的序列属于a．醇溶蛋白家系成员，其基因的重复区段 尚未出现，具有8个半胱氨酸残基，推测其仅．醇溶蛋白序列为小麦族物种的祖先 序列。 摘要 (2)克隆了62个簇毛麦属三物种a一醇溶蛋白基因序列，发现二倍体多年生 簇毛麦a．醇溶蛋白基因分化较早，为古老的类型，而四倍体多年生簇毛麦和二倍 体一年生簇毛麦的分化较晚。a一醇溶蛋白基因的聚类结果支持四倍体多年生簇毛麦 不是由二倍体一年生簇毛麦加倍产生，而是由二倍体多年生簇毛麦加倍产生的观 点。研究还发现a．醇溶蛋白基因的启动子序列长度具有较大的多态性，根据多态 性序列设计引物获得了簇毛麦特异的a．醇溶蛋白基因的PCR标记，成功地应用于 小麦背景中簇毛麦6VS染色体片段的跟踪之中。 (3)分离了94个偃麦草属及其祖先物种(--倍体长穗偃麦草、拟鹅观草、 百萨偃麦草和中间偃麦草物种)的仅．醇溶蛋白基因序列，分析认为中间偃麦草基 因组为多个近缘物种基因的重组，簇毛麦基因组与偃麦草多倍体物种的遗传关系 较近，该结论得到了基因组原位杂交的支持，同时发现偃麦草物种多倍体化过程 中，有MITE的插入醇溶蛋白基因，加速了功能基因组的遗传分化。 (4)克隆了来自澳冰草、冰草和旱麦草属物种的48个a．醇溶蛋白基因序列， 系统发生树分析发现了澳冰草基因组中醇溶蛋白基因发生了多次进化。澳冰草、 冰草属中的Q．醇溶蛋白基因均不具有毒性多肽位点，表明o【．醇溶蛋白基因毒性多 肽位点是出现于该属物种分化之后。 (5)在小麦属物种中国节节麦和育成小麦新品种“成电麦1号中分离了25 个a．醇溶蛋白基因序列，从中发现了具有不同半胱氨酸残基的序列，可以作为小 麦品质育种的供体基因源。 (6)综合分析小麦族物种的仅．醇溶蛋白基因的多态性指数和物种，与小麦物 种分化的过程，我们推测，小麦族物种a一醇溶蛋白基因在25．30百万年从丫．醇溶 蛋白的祖先分离出来，即最先起源于黑麦属的祖先物种，而后在澳冰草、拟鹅观 草属和偃麦草属物种发生3次以上基因组的快速进化，并随3．5百万年小麦近缘种 属和多倍体化过程中发生了快速基因组分化。毒性多肽位点Glia-a可能约在12．15 百万年前，其他3个毒性多肽位点Glia-ct．2，9，20均在小麦物种形成后迅速产生， 可能与自然选