小鼠体外受精胚体内胚oct4基因启动子区dna甲基化差异的研究.pdfVIP

中文摘要 DNA甲基化是表观遗传修饰的主要形式之一，对哺乳动物的正常发育至关 重要。体细胞中DNA甲基化模式是稳定的，但在早期胚胎中DNA会发生去甲 基化和再甲基化。Oct4是一种与胚胎发育相关的多能调控因子，它在建立和维 持细胞多能性方面起着重要作用。本试验以Oct4基因作为候选基因，运用亚硫 酸氢盐测序法，对小鼠体细胞、生殖细胞以及早期胚胎发育过程中各个时期Oct4 胚中的甲基化进行比较。’ 试验所获得的各种检测材料经低熔点琼脂糖包埋、亚硫酸氢盐变性处理后 进行巢式PCR扩增。然后将PCR产物进行纯化、连接、转化于感受态大肠杆 菌中。对转化后的菌体进行菌体PCR鉴定，将有特异性条带的菌液送检测序。 对测序结果进行分析。结果显示：(1)体细胞基因组中Oct4启动子区呈高 度甲基化状态(73．8+5．9％，平均数±标准差)，极显著高于精子和卵子(PO．01)； 精子和卵子之间甲基化水平也存在显著差异(P0．05)，精子中略微甲基化 时期胚胎Oct4启动子区均呈低甲基化状态，2一细胞、4一细胞、8416。细胞和桑椹 基化逐渐丢失，但无显著性差异(Po．05)；而在囊胚期，Oct4启动子区甲基化 水平显著升高(6．88±2．4％，P0．05)，重新甲基化开始。(3)小鼠体外受精胚 与体内胚甲基化模式相似，其各时期胚胎Oct4启动子区也呈低甲基化状态，从 2-细胞至桑椹胚，随着胚胎发育而呈下降趋势，相互之间差异不显著(PO，05)， (4)对比体外与体内各时期胚胎Oct4启动子区甲基化水平，体外2一细胞胚甲 基化水平显著高于体内2。细胞胚(P0．05)，其余各时期胚胎虽均高于体内胚， 但相互之问无显著性差异。 以上结果表明，小鼠体外受精胚在早期发育过程中也能发生较有效的重编 程，所构建的胚胎部分可以发育至囊胚，但其各个时期的甲基化水平均要高于 相应时期的体内胚，尤其在2一细胞期，这可能是造成体外受精胚发育到期的比 例低于体内受精胚的原因。 关键词：DNA甲基化，Oct4启动子，体外受精，胚胎，小鼠 Abstract DNA the essentialfor of majorepigeneficmodifications，is methylation，one in mammaliannormal DNA isstablesomatic development．耽emethylationpattern denovo and in cells，but methylationdemethylation，namelyreprogramming，occur isoneofthecritical and roles regulators earlyembryos．Oct4 phiripotency playskey in of normal theestablishmentandmaintenance during embryogenesis． pluripotency Sothe of waschosenas tOdetermine Oct4 region targets methylation promoter and mouse bisu