蓝刺头水提物对验性ⅰ型糖尿病小鼠降血糖作用及其机理研究.pdf

LIIIIIl IIIIII Illll lIII IIlllIIII 57 V26007 摘 要 糖尿病是继肿瘤和心血管疾病之后第三大影响人类健康的疾病，其发病人数 呈逐年上升的趋势。因此，寻找使用方便、疗效确切的血糖控制药物，对糖尿病 及其并发症的治疗显得十分重要。蓝刺头具有多种药理活性，民间有利用蓝刺头 进行糖尿病辅助治疗的传统，但国内外均未见相关研究报道，本文以I型糖尿病 小鼠模型为研究对象对蓝刺头水提物(WET)的降血糖作用进行观察，进而确 定了蓝刺头水提物中降血糖的有效成分，并对其降血糖的分子机理进行了相关研 究，以便为新型降血糖药物的开发提供参考依据。 1．在按照85mg／kg体重剂量尾静脉注射1％的四氧嘧啶溶液成功构建I型 糖尿病小鼠模型的基础上，对WET的降血糖作用进行了观察。结果发现，WET 能够显著地降低糖尿病小鼠的空腹血糖，改善口服糖耐量，升高肝糖原和血清胰 岛素含量，对糖尿病小鼠的体重和胰高血糖素影响不显著；而对健康小鼠的空腹 血糖、口服糖耐量、肝糖原、血清胰岛素、体重和胰高血糖素含量均不产生影响。 确定WET对I型糖尿病小鼠具有降血糖作用，对健康小鼠血糖不产生影响。 2．为确定WET中降血糖的有效成分，首先对WET中可能含有的降血糖物 质进行了鉴定，结果显示WET中确定含有多糖类成分，并采用水提醇沉法获得 ETCP能够显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖。采用木瓜蛋白酶法去除ETCP中的 蛋白质，并对其工艺参数进行优化，在反应时间为2．6h，体系pH为6．0，反应 温度为64℃的条件下多糖保留率为98．12％，蛋白清除率为56．57％。将脱蛋白后 溶液进行洗脱分级得到一种中性多糖ETPA和两种酸性多糖ETPB、ETPC。将三 G200柱层析，采用蒸馏水进行洗脱分级，确定ETPA含 种多糖分别经Sephadex 低I型糖尿病小鼠的空腹血糖，确定WET中降血糖的主要成分为ETPB。 3．对灌胃ETPB后I型糖尿病小鼠的空腹血糖、体重、口服糖耐量、肝糖 原、血清胰岛素和胰高血糖素含量进行了测定，并利用实时荧光定量PCR的方 G．6．P基因的相对表达量进行了研究，分析ETPB对I型糖尿病小鼠降血糖作用 的分子机制。结果发现ETPB能够降低糖尿病小鼠的空腹血糖，增加体重，改善 口服糖耐量，增加肝糖原和血清胰岛素含量，对胰高血糖素无影响。实时荧光定 达无影响。综合分析ETPB降血糖的分子机理为ETPB通过上调胰腺PDX．1和 IRS．2基因的表达，增加胰岛D细胞的再生，下调胰腺中凋亡相关因子Fas， 因的表达增加血清胰岛素的含量，同时促进肝脏中GK基因的表达提高肝脏糖代 谢能力，相关实验研究也证明了这一结论。 全文研究表明，WET具有较好的降血糖作用，其中ETPB为其降血糖作用 的主要成分，其可能机制包括促进胰岛D细胞的再生、抑制胰岛p细胞的凋亡、促 进胰岛素的分泌、提高肝脏糖代谢能力。但ETPB的结构有待进一步的明确，同 时其降血糖作用机理需进行更深入的研究，为蓝刺头作为降血糖药物的开发提供 更充足的数据。 关键词：蓝刺头水提物；I型糖尿病；多糖分级纯化；胰岛D细胞；胰岛素；肝 糖原 in andMechanism on activity Anti．hyperglycemic Study from