蒙古羊卵巢组织异表达基因的克隆、筛选、鉴定和特征分析.pdf

摘 要 绵羊的多产性状是养羊业获得更多经济效益的重要途径，为研究蒙古羊及国内外 绵羊多产性状的分子遗传机理，以蒙古羊为主要研究对象，采用分子标记技术和抑制 消减杂交技术(SSH)，从候选基因和差异基因筛选入手，研究蒙古羊和其他绵羊品 种产羔性状的遗传多态性，探讨蒙古羊产双羔的形成因素及其分子遗传机理： 1、绵羊繁殖性状候选基因的研究 毛羊、呼伦贝尔羊、萨福克、道塞特和德国肉用美利奴7个绵羊品种共375个样本为 果表明：(1)国内4个绵羊品种和德国肉用美利奴中均检测到BMPl5外显子1的突 变，呈现三种基因型，在第28—30位的碱基缺失，导致编码区第lO号亮氨酸缺失， 形成B1突变体，其它两个品种没有突变；在BMPl5基因的B2和B4位点没有检测 了与Booroola 现突变位点。 2、蒙古羊卵巢差异表达基因的筛选和特征分析 (1)用抑制性消减杂交技术(SSH)成功构建了经产单、双羔蒙古羊的正反向 差减cDNA文库，在两个文库中分别随机挑取了384个克隆。利用PCR技术进行鉴 定，分别获得了768个阳性克隆，插入片段长度主要分布在150～1000 bp之间。 (2)正、反向消减cDNA作探针对两消减eDNA文库中的阳性克隆进行了筛选。 斑点杂交筛选、测序分析和序列比对，我们揭示了47个差异EST，10个在绵羊中为 己知基因，4个未知基因，其中27个与其它物种的基因有较高的同源性(80％以上)， 6个未找到明显的同源性。 3、影响绵羊排卵全长基因BMPl5的克隆与序列分析 成功克隆了影响绵羊排卵全长基因BMPl5，序列全长6642bp，包括两个外显子 和一个内含子，外显子长1182bp，编码393个氨基酸，经序列比对分析，发现蒙古 羊和其它物种的BMPl5基因的序列同源性很高，而与禽类和鱼类动物之间，同源性 较低，20％以上，同时预测了蒙古羊BMPl5氨基酸序列的高级结构。 关键词：蒙古羊：卵巢；BMPs；克隆；多态性；抑制性消减杂交：序列分析 ofthe andCharacterization electing，Identification Cloning，S between Genes Ovary Expressed MongolianSheep Differentially Abstract moreeconomic of isan toincrease Thetraitof sheep importantapproach prolificacy of characterof mechanism themolecule fertility toresearch bene丘t．iIlorder genetic at and take as andother breedshomeaboard，weMongoliansheep sheep sheep Mongolian