苏云金芽胞杆菌分离鉴定及高毒力菌株的研究.pdfVIP

摘要 苏云金芽胞杆菌(Bacillus 蛋白的革兰氏阳性细菌，属于芽胞杆菌属，在自然界中分布广泛，很多高毒力或具 有特异杀虫活性的新菌株不断被发现。本论文围绕苏云金芽胞杆菌新菌株的筛选、 鉴定、评价及杀虫基因克隆等方面开展了一系列的研究，主要结果如下： 1．从河北省、内蒙古及吉林省等不同地区共采集367份土样，利用醋酸钠．抗 生素筛选法并结合复红染色分离鉴定苏云金芽胞杆菌，共得到75株Bt菌株，出菌 率为12．27％。这75株野生菌株的伴胞晶体有菱形、球形、米粒形和不规则形等。 cry2、cry3、 2．PCR．RFLP基因型分析结果表明，这75株Bt菌含有cryl、crylA cry34—35、cyt2和vfp3A18种基因型。其中cry2基因含量最高，占总菌株数的43．24％， crylI基因位居第二，占36．49％。还有12株菌未鉴定出基因型。 对二点委夜蛾(Athetis lepigone)的幼虫均表现出较高的杀虫活性，基因型分析表 crylAc是对二点委夜蛾起主要作用的基因。 4．Bt YX．1菌株对梨小食心虫(Grapholita orana)、苹掌舟蛾(Phaleraflavescens)苹果蠹蛾(Cydiapomonella)、美国白蛾 limra)、 (Hyphantriacunea)、棉铃虫(Helicoverpaarmigera)、斜纹夜蛾(Prodenia 甜菜夜蛾(Spodoptera YX．1菌株对这些害虫幼虫 xylostella)等果树及蔬菜害虫表现出广谱杀虫活性，Bt 的毒力均高于BtHD．1菌株。BtYX．1菌株产生菱形伴胞晶体；SDS．PAGE分析表 YX一1的最佳 粉18∥L、酵母粉69／L、蔗糖lg／L、MgS04·7HzO0．29／L、KH2P04lg／L、CaC030．Sg／L、 FeS04·7H20 0．069／L、余者用水补足。 式命名为cry8Fa3。 关键词：苏云金芽胞杆菌；PCR-RFLP：杀虫活性；基因克隆；cry8Fa3 IsolationandIdentificationofBacillus andResearchof thuringiensis HighToxicity Strains Mastercandidate：SuJun ping WangQin徊g Supervisor：Professor InsectandPestControl Major：Agricultural 4bstraet Bacillus a bacterium．Itsis thuringiensis(Bt)isubiquitousgram—positive activity attributedtotheinsecticidal CrystalProteins，ICPs) largely crystalproteins(Insecticidal aS