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盐胁迫下药物对水稻基因差异性表达的分析 中文摘要 从寡核苷酸基因芯片检测到的盐胁迫下诱抗剂处理的水稻R6的差异基因LIJ 中，选择部分上调或下调比率高的基因包括P450家族、MDR家族部分基因和某 些转录因子进行研究。 在诱抗剂HI能够提高水稻R6耐盐能力H的基础上，本试验通过在盐胁迫下 R6幼苗的形态变化，并用半定量RT-PCR技术研究药物、诱抗剂HI、HI．药物处 理对上述基因表达的影响，揭示这些基因在盐胁迫下的表达差异，探讨这些基因 是否与R6幼苗的耐盐性有关，期望挖掘诱抗剂诱导耐盐的相关基因和揭示水稻 耐盐的分子机制。主要结果如下： 1．不同处理的水稻I№在NaCl胁迫下的苗期形态表现 与H20对照相比，盐胁迫下用药物处理和m预处理后，各种药物处理的 R6的苗高和根长都受到一定程度的抑制。与NaCI对照相比，诱抗剂HI促进R6 根伸长，幼苗比盐处理的稍高。与NaCl对照相比，EM、Cim抑制苗高和根长， RFP促进苗高抑制根长，H、CsA、VP促进根长且幼苗比盐处理稍高。与诱抗剂 根变粗、胚根增多、根长稍微增长，HI．EM．S处理与EM处理均抑制根长。 HI．Cim．S和Cim．S．HI处理的苗高整体上相差不大，出现根长较短、苗高较矮、 苗顶端白化等现象。 2．半定量RT-PCR检测的不同处理对R6目的基因表达的影响 2．1NaCl胁迫对R6目的基因的影响 根中NaCI胁迫上调P8，下调P16，结果表明这些基因可能是R6的耐盐性基因。 2．2诱抗剂m和恶霉灵处理对R6目的基因的影响 ’ P32，下调P15、P27、P29、P65。 根中H处理时，除P31外，其它基因差异表现与基因芯片相吻合。根中H 处理和叶中H、诱抗剂HI处理基因差异表现相当吻合。 P8、P1 抗剂HI处理影响显著的基因。叶中H处理后P27的表达加强。诱抗剂HI处理 录因子的P28、P29表达差异明显。 2．3盐胁迫下不同药物处理对R6目的基因的影响 与NaCI对照相比，各种药物单独处理对基因特异表达为：叶中CsA对P7、 P28、Cim对根中P15的表达特异诱导。各种药物单独处理对基因增强(上调或 药物以及HI．药物处理影响显著的是：叶中CsA处理P8、Cim处理P28、 P31、VP处理P7、P18的表达明显被抑制；根中VP处理P7的表达被明显抑制。 总体上，在根和叶中，Cim对目的基因的表达主要起抑制作用，RFP主要起 诱导作用；VP在叶中有一定的抑制作用，但在根中主要起诱导作用；EM在叶 和根中抑制一些基因的表达，但也诱导某些基因的表达；CsA在叶中抑制作用不 明显，影响基因比较少。 2．4诱抗剂m预处理后不同药物处理对R6目的基因的影响 与诱抗剂HI处理相比，诱抗剂HI预处理后药物处理，在叶中整体趋势为显 下调的是P9、P29、P65；另外，P65在根和叶中变化趋势相反。 诱抗剂HI的处理效果被药物显著影响的是：在根中，m预处理后CsA和 理P64的表达被完全抑制。 Ⅱ 诱抗剂m预处理有效调节了药物处理对基因表达的影响，提高R6耐盐性， P450和PGP家族基因的诱导剂和抑制剂可能与诱抗剂HI相互作用，使基因表 达发生变化，进而对R6耐盐性产生一定影响。 2．5诱抗剂m预处理后药物处理与单独药物处理对R6目的基因的影 响 药物的处理效果被诱抗剂HI逆转的是：HI逆转Cim对叶P7、Pll、P15、 P11、根P7和P8的抑制。 作为诱抗剂的HI可以逆转抑制剂对基因表达的抑制，也可以增强诱导剂对 基因表达的诱导，诱抗剂HI与药物可能存在着互作协同作用，调节基因表达， 提高抗性，使植株得以生存或生长发育正常。 2．6西咪替丁和诱抗剂m处理时序不同对R6目的基因的影响 先用Cim预处理后用m处理，叶中表达完全被抑制的是P15、P27、P65， P9、P17、P18；叶中表达被增强的基因是P16，在根中为P1l。 根和叶中Cim和HI处理顺序不同，受影响的基因主要是P450家族基因， 可能是诱抗剂作为一种外源物先被P450代谢，其代谢物的活性诱导，有利于提 高了水稻R6的耐盐性。 关键词：水稻，诱抗剂，诱导剂，抑制剂，基因差异表达，细胞色素P450，P． 糖蛋白，半定量RT-PCR