山楂总黄酮提取艺、提取物活性及指纹图谱研究.pdfVIP

摘要 摘要 山楂为蔷薇科植物，是一种重要的药食两用资源，在我国种植栽培面积广 阔，产量可观。现代研究证实，山楂具有抗动脉粥样硬化，降血压，降血脂， 增加冠脉血流量，抗氧化，防癌、抗癌，以及提高机体免疫力等生理活性，研 究表明，这些生理活性与山楂中所含的黄酮、原花青素以及三萜酸等活性成分 有关。但现有研究主要停留在一些简单的提取工艺及粗提物的加工上，这极大 的影响了山楂及其活性成分的有效利用。为此，本研究构建了山楂总黄酮的分 析方法：将超临界C02萃取新技术应用于山楂活性成分的提取中并优化了山楂 总黄酮提取工艺，对各种提取物抗氧化功能进行了比较研究：结合 HPLC．DAD．MS联用技术系统研究了山楂活性成分的指纹图谱，以期有效控制 山楂药材质量。主要研究概述如下： 1．将改进后的聚酰胺吸附与NaN02．AI(N03)3比色法用于山楂总黄酮测定， 减少了杂质的干扰，并且优化了显色时间，结果表明该方法精密度高，重现性 好，显色稳定，加样回收率高，该方法能更准确的测定山楂总黄酮的含量。 2．采用乙醇回流法提取山楂总黄酮，以测得山楂样品中总黄酮含量为指标， 选用正交表L9(34)对山楂总黄酮提取工艺进行研究。试验结果表明：最佳提 取条件为用70％乙醇，固液比为l：20，在70℃下提取2h，重复提取2次，此时 总黄酮得率为3．97％。 3．研究了超临界C02萃取技术提取山楂总黄酮的最佳工艺。通过考察萃取 压力、萃取温度和萃取次数等影响因素，运用中心组合试验设计和响应面分析 法分析得到最佳的萃取工艺条件为：萃取压力36．6Mpa，萃取温度47．8C，萃取 4次(40mL95％乙醇夹带剂，萃取2h)，最优工艺条件下的总黄酮得率为0．59％。 4．通过研究山楂不同提取物对DPPH自由基和02‘·自由基的清除作用考察 其抗氧化活性。结果表明，山楂各种不同提取方法获得的山楂提取物均有抗氧 化活性，不同提取物抗氧化活性强弱为：醇提物超临界C02萃取物水提物， 提取物量与抗氧化活性呈正相关。通过测定山楂提取物乙酸乙酯、正丁醇和萃 余物三个萃取部分清除DPPH·自由基的能力，发现乙酸乙酯萃取部分清除 DPPH·自由基能力和抗氧化活性最强。 II 摘要 5．建立了不同山楂样品的HPLC指纹图谱，并采用HPLC．DAD．MS联用技 术获得了指纹图谱的多维信息，参照现有文献，对指纹图谱中的主要色谱峰进 行了结构归属的初步判断，鉴定了7个共有峰。对色谱指纹图谱进行相似度计 算，获得了令人满意的结果，并生成了对照指纹图谱，该法为山楂样品的鉴定 提供了较全面的信息，有助于提高山楂药材的质量控制水平，同时深化了 HPLC．DAD．MS联用技术在中草药复杂组分分析和鉴定中的应用。 关键词：山楂，黄酮，总黄酮测定，回流提取，超临界C02萃取，中心组 合，响应面，抗氧化，液质联用，指纹图谱 Ill Abstmet Abstract tothe been Hawthorn(Crataegus Rosaceae pinnatifida)，referringfamily,has usedasherbsandediblesfora timeandhasbeen inChimL long plantedwidely Many researchesshowedthatHawthornhas activitiessuchas manybiological reducing blood andtotal the of pressure pl