水杨酸在葡萄高胁迫过程中的信号作用及与蛋白质磷酸化关系的研究.pdfVIP

中文摘要 L 本研究以葡萄r京秀，(Vitisviniferacv，Jingxiu)一年生扦插苗萌芽后70天的苗和该品种 SA不同时间处理后，探讨了高温胁 lamol／L 坐果后30天的果实为试材，分别用40℃高温和150 迫和水杨酸(sA)对葡萄叶片和果肉细胞内蛋白激酶的诱导和活性的影响，从分子水平上进一步 研究了SA作为信号分子在高温胁迫中的作用。主要结果如下： 高温胁迫和sA处理均激活了叶片中能将底物MBP磷酸化的蛋白激酶，当MBP浓度为0．5 mg／mL时该激酶活性达到最高值，其后，随底物浓度的增大，活性出现下降趋势。该蛋白激酶对 底物组蛋白—_ⅡI(histone．Ⅲ)没有作用。反应体系中ATP浓度以50IunottL为宜，浓度过高时激 mmol／L时激酶活性达到最大值。ca2+对激酶活性的影响较小。Mn” 酶活性下降。Mf+浓度为5 min和 对激酶活性的激活没有作用。凝胶中底物磷酸化放射自显影结果表明，被高温胁迫10--60 SA处理30180rain所激活的蛋白激酶的分子量约为52kD，该蛋白激酶能将凝胶中所嵌入的髓 则无作用。在溶液反应体系中该蛋白激酶对MBP也表现出很高的磷酸化活性，而对histone—M却 无作用。ca2+对其活性变化无显著影响。在以MBP为底物的反应体系中，pH为7．5时，激酶的 活性最高。酪氨酸特异性蛋白磷酸酶(YOP)对该激酶的活性有显著的钝化作用。结果表明该52 kD蛋白激酶是MAPK家族中的一种。 min和 采用果实圆片温育法，对果肉细胞进行高温和SA处理的结果表明：高温胁迫5—20 SA处理5--4，0min均分别激活了果肉细胞中的蛋白激酶，放射自显影显示出在52kD处凝胶中的 MBP被磷酸化．以histone-lII为底物时，则在42kD处histone．M被磷酸化。在液体反应体系中， kD蛋白激酶有很强的磷酸化活性，此时ca2+对其活性没有激 以MBP为底物有Mf+存在时．52 活作用。与叶片一样，YOP对52kD蛋白激酶有钝化作用。以histone．M为底物有ca2+存在时． 42kD蛋白激酶有很强的磷酸化活性。对C矿有明显的依赖性。该激酶对CalVl没有依赖性． Calmidazolium和w7对该激酶的活性有强烈的抑制作用。 高温胁迫诱导了葡萄叶片和果肉细胞中SA含量的迅速上升。对叶片而言．胁迫30min时， 游离态和结合态sA含量均达到高峰，而果肉细胞中sA含量则在20 rain时达到高峰，随后其含 量迅速下降。无论在叶片中还是果肉细胞中均以游离态SA的变化更为活跃。分析表明，sA含量 的变化与蛋白激酶活性变化有高度的一致性。结果证明：高温胁迫和外源SA处理在叶片和果肉 kD kD 细胞中被激活的52 MAPK类和42 CDPK类的蛋白激酶．与sA有密切的关系，证明了sA 的确是高温胁迫应激响应中的信号分子。 关键词：高温胁迫，水杨酸．葡萄叶片．果肉细胞．蛋白激酶 X Abstract andberries afterfruit ofgrape(Fitis Dlantsof70 of30days setting aRerbudding One-yeat-olddays