抗虫耐草甘膦融基因表达载体的构建及在转基因烟草中的分析.pdf

摘要 随着植物基因工程的发展，将多个基因转化植株已成为研究的热点之一，利用连 接肽进行多个基因融合的策略已引起广泛关注。以2A和LP4为连接肽表达的融合基 因在植物中表达时会发生剪切，将两个基因分开。本论文利用连接多肽2A和LP4／2A 分别与抗虫新基因Bt crylAh和编码EPSP合酶的耐草甘膦基因鹏连接起来构建融合 基因表达载体，既可以达到两个基因的融合，又可以通过剪切形成两个蛋白分别行使 功能。 为了比较连接肽2A和LP4／2A的剪切效率，以及不同基因与连接肽连接位置差异 对基因表达的影响，利用重叠PCR及DNA克隆技术共构建了四个融合基因表达载体： 基因在后，前者以2A为连接肽，后者以LP4／2A为连接肽．同时构建了两个单基因载 体pSAh、pSmG。作为对照，比较两基因在不同载体中表达量的异同。 利用农杆菌介导法将构建的植物表达载体转入烟草中，得到再生植株529株，经 测结果阳性的植株，分别利用crylAh，施基因内部引物进行PCR扩增，结果表明目 的基因整合到了烟草的基因组中；RT—PcR结果显示转化的外源融合基因在烟草体内 正确转录，融合基因在转录水平上没有发生剪切；Western