主动免疫重组绵β2-肾上腺素受体对大鼠生长及血清生化指标的影响.pdf

主动免疫重组绵羊β- 肾上腺素能受体对大鼠生长及 2 血清生化指标的影响 摘 要 本研究包括2 个试验，用于研究主动免疫重组绵羊β-肾上腺素能受体（β-adrenoceptor，β-AR ） 2 2 2 第二细胞外环融合蛋白对大鼠生长性能、屠宰和内脏指标、血清生化指标的影响。主要研究工作如 下： 重组绵羊β2-AR 的表达、纯化与鉴定 本试验对不同诱导时间、诱导剂IPTG 终浓度、培养温 度和振荡培养箱转速等4 个诱导培养条件对绵羊β2-AR 第二细胞外环重组质粒pET32C-AR/Se 在大 肠杆菌 BL21(DE3) 中表达水平的影响进行了研究，以筛选其最佳培养条件。利用Ni-IDA 柱层析以 及盐酸胍梯度透析对目标蛋白进行纯化，采用 SDS和western blotting 对目的蛋白进行了鉴 定。研究结果表明，随着IPTG 诱导时间的延长，重组绵羊β2-AR 第二细胞外环的相对表达量逐渐 增加，在2 h 时相对表达量达到最大值，为菌体总蛋白的30.1% 。IPTG 终浓度在0.01~2 mmol/L 之 间时，重组绵羊β2-AR 第二细胞外环的相对表达量水平均在27~30%左右；当IPTG 终浓度为 0.01 mmol/L 时重组绵羊β2-AR 第二细胞外环的相对表达量最高，占菌体总蛋白的30.5% 。在设置的4 个 诱导温度中，25 ℃时重组绵羊β2-AR 第二细胞外环的相对表达量最高，占菌体总蛋白的35.5% 。在 振荡培养箱不同转速条件下，重组绵羊 β2-AR 第二细胞外环的相对表达量在 33~40%之间波动；在 200 rpm 时，相对表达水平最高，为细菌总蛋白的40.0% 。通过SDS和western blotting 鉴定 发现分子量大约在26 kD 左右。绵羊β2-AR 第二细胞外环基因在大肠杆菌中的表达最佳条件为：重 组菌株在LB 液体培养基中生长至OD600 0.5 左右时，加入IPTG 至终浓度0.01 mmol/L ，于25 ℃、 200 rpm 诱导120 min。 主动免疫重组绵羊β2-AR 对大鼠生长及血清生化指标的影响 选用175 g 左右的wistar 雌性大 鼠45 只，随机分为3 组，分别对照组、免疫组和激动剂组。对照组和免疫组分别免疫佐剂和重组绵 羊 β2-AR，在试验开始后第二周初次免疫和第四周进行加强免疫；激动剂组从试验开始第三周添加 盐酸克伦特罗（3 mg/kg ）。所有组在第六周后采血并屠宰，测定屠宰和内脏指标及血清生化指标。 结果表明：主动免疫重组绵羊β2-AR 对大鼠体重和采食量均没有显著影响；与对照组相比，免疫组 大鼠肝脏和肺重分别增加13.83% （P0.05 ）和18.46% （P0.05 ）；腹脂重量有减少的趋势，比对照 组减少了 12.20% （P=0.11 ）。主动免疫重组绵羊β2-AR 使大鼠血清尿素氮、甘油三酯和总胆固醇水 平分别降低了9.68% （P0.05 ）、20.21% （P0.05 ）和8.81% （P=0.087 ）。由此可见：主动免疫重组 绵羊β2-AR 不影响大鼠采食量和体增重，但具有减少体蛋白分解，并促进体脂脂解的作用。 关键词：β2-肾上腺素能受体；诱导表达；主动免疫；脂解；大鼠 I Effects of Active Immunization of Recombinant Sheep β2-adrenoceptor on Growth Performance and Serum Parameters in Rats Abstract In the present study, two trials were conducted to evaluate