基于淋病奈瑟菌外膜蛋白pIA.pdfVIP

·272· 实验室研究· 基于淋病奈瑟菌外膜蛋白夕m一夕阳融合基因 重组产物酶联免疫吸附试验的建立和应用 孙爱华 范兴丽 严杰 【摘要】 目的克隆淋病奈瑟菌外膜蛋白声m、p侣基因并构建声m一声忸融合基因及其原核表 达系统以及建立基于rPIA_PIB的酶联免疫吸附试验(ELIsA)。方法采用连接引物PCR构建声LA． 声膪融合基因，按常规分子生物学方法构建其原核表达系统。采用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶 层析法提纯rPIA—PIB。以rPIA—PIB为包被抗原建立检测淋病患者血清标本中rPIA和／或rPIB特异 性IgG的ELISA，以rPIA—PIB抗血清为一抗建立检测淋病患者脓液标本中rPIA和／或rPIB的 ELISA，实验中以rPIA、rPIB及其抗血清相关ELISA为对照。结果声m一声JB融合基因与原始核苷 酸和氨基酸序列相似性均为100％。rPIA—PIB表达量为细菌总蛋白的29．8％，其提纯物SDSPAGE 后显示单一条带。rPIA—PIB—IgG．ELISA检测119例淋病患者血清标本的阳性率(98．3％)明显高于 (P0．01)。结论成功构建淋病奈瑟菌声m一声忸融合基因及其原核表达系统；较之单一的rPIA或 rPIB，rPIA．PIB作为淋病相关检测试剂盒抗原具有明显的优越性。 【关键词】淋病奈瑟菌；融合基因；酶联免疫吸附试验 Establishmentand Of linked b瓠edontheoutermembrane applicatiOnenzyme immunosorbent嬲say pJA— fusion SLW pIB geneof№洳er缸go开口，地。船e Ai一是挂＆‘，F4NⅪ携g_Zi，WW．，搪．’凡c“Z缈盯B口5缸 M已dic口Z M已矗ici，z已，Z矗e∥口以g G口ZZ曙P，Hn竹gz矗o“310053，China JiP，Email：Medbp(少zju．edu．cn Cor，’邪声。卵di咒g口“￡矗or：YAN To toconstruct 【Abstract】Objectiveclone户JAand户Ⅱ；genes。fN叠i耶已r缸gD720rr^o阳已，andpjA一 linkedimmurlosorbent andits toestablishenzyme 户阳fusiongene prokaryoticexpressi。nsystem，and assay onrPIA．PIBfor serumand fr。m andtoevaluate (ELISA)based detecting pussamplesgonorrheapatients the and oftheELISA．Methods fusion wasconstnlcted sensitivityspecificity 声L4一声旧 gene by chain anda ofthefusion polymerasereaction(PCR)using1inkingprimers prokaryoticexpressionsystem wasconstructedroutinem01ecular methods．sOdium gene byusing biological dodecylsulfate—p01yacrylamide tomeas