鸡piwi的亚胞定位及其沉默效率的研究.pdfVIP

鸡尸fwZ的亚细胞定位及其沉默效率的研究 誓究嘉!喜詈蓁副教授导师：常国斌副教授 l删YZ4’I了，了q 专业：动物遗传育种与繁殖 (扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009) 摘要 P咖f基因主要存在于生殖细胞中，在生殖系干细胞的维持和精子发生方面发挥重要作 熟知。迄今为止，国内外学者已在小鼠、果蝇、人、恒河猴、猪、新杆状线虫、鹌鹑等物 种中对尸伽f基因进行了一系列的研究，而对鸡P伽f基因的研究甚少。本实验以鸡为模式 h、48h和72 技术转染PGCs，运用Real．Tune h后PGCs中尸Mf qPCR技术检测转染24 基因、生殖细胞形成和配子发生相关的调控因子(C掰、Dazl)以及调控干细胞多能性及 位及其在生殖干细胞和配子发生中的功能研究提供基础依据。结果表明： 表明免疫荧光技术更适合 pEGFP．C1．Piwi相比，pcDNA3．1．Piwi载体实验结果更可靠。 PIWI蛋白的定位研究。 2．细胞水平上的特异性shRNAs抑制实验结果发现：24h后可检测出明显抑制，48h达到 高峰，72 h后开始减弱。在3个不同的时间点，空白对照组与阴性对照组相比均无显著性 尸咖f基因的表达在不同时间均有不同程度的抑制作用，且抑制效果与shRNA序列相对于 靶基因的位置和转染时间长短相关。转染48 效率最高。 3．鸡胚水平上的特异性shRNAs抑制实验结果发现：在三个时间点，阴性对照组与空白对 涉质粒shRNA．2的P咖f相对表达量最低。三个时间点之间进行比较，出现明显的抑制效 表达产生不同程度的抑制作用，且转染时间的长短和shRNA序列相对于靶基因的位置影 响尸Mf基因的抑制效果，shRNA．2序列的沉默效率最高，与细胞水平上的实验结果一致。 4．Real．Time 阴性对照组相比，抑制尸咖f基因表达后，CVH、Dazl基因表达量上升，两者之间差异显著 胚CVH、Dazl 关键词：Pfwf；鸡；PGCs；shRNA；胚盘下腔注射；Real．Time qPCR Piwi andits Sub·-cellularlocalizationofchicken gene ef|ficiency MD Dai candidate：Aiqin Prof．Guobin Chang Supervisor：Associate and genetics，breedingreproduction Major：Animal ofAnimalScienceand (College Technology,Yangzhou Abstract Piwi inthe cellsand an rolei11the genesmainlypresentgerm play