H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(5):1797-1804 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.05.037 H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立 及高产细胞型疫苗株的拯救 1 1 1 1 1 2 2 1 刘大飞 ，刘 明 ，刘春国 ，杨 涛 ，万春和 ，陈 浩 ，齐金龙 ，杜金玲 ， 李洪涛 2 3 4 ，孙恩成 ，刘大程 1 2 （中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，哈尔滨 150001 ； 东北农业大学动物医学院， 3 4 哈尔滨 150030 ； 黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163319 ； 莱阳市城厢兽医站，山东莱阳 265200 ） 摘要： 【目的】建立 H1N1 亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制 的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术，对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次 成功拯救出全部片段均来自于亲本株的猪流感病毒rH1N1，并且成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株re-LM株， 研究结果表明二者均具有良好的遗传稳定性。rH1N1经MDCK细胞连续传代培养后，血凝价最高仅为1 ﹕64；而re-LM 的血凝价最高可以稳定在1 ﹕1 024，表明该毒株具有细胞繁殖高产的特性。用该重组病毒制备油乳剂灭活苗免疫 2 月龄仔猪，首免 2 周即可检测出 HI 抗体，平均效价在 1 ﹕32 以上，三免后 2 周 HI 抗体平均效价达到 1 ﹕512， 说明其有良好的免疫原性。【结论】H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、 传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础；重组细胞高产型猪流感病毒株的拯救为H1N1亚型猪流感疫苗的研制 开辟了新的途径。 关键词：猪流感；H1N1亚型；反向遗传操作技术；细胞培养型流感疫苗 Establishment of Reverse Genetics of H1N1 Subtype Swine Influenza Virus and Generation of Cell Culture High-Yield Recombinant Vaccine Candidate 1 1 1 1 1 2 2 1 LIU Da-fei , LIU Ming , LIU Chun-guo , YANG Tao , WAN Chun-he , CHEN Hao , QI Jin-long , DU Jin-ling , 2 3 4