H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(2):587-592 Scientia Agricultura Sinica H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析 1,2 2 2 2 2 1 王方昆 ，袁秀芳 ，王一成 ，张 存 ，徐丽华 ，刘思当 1 2 （山东农业大学动物科技学院，山东泰安 272018 ； 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州 310021 ） 摘要： 【目的】对H9N2亚型猪流感病毒NS1（nonstructural protein 1）基因进行原核表达，获得纯化表达 产物，以期为检测猪流感抗体的 ELISA试剂盒的研制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增了猪流感病毒（H9N2）的 NS1 基因，将其克隆于表达载体pET-28a（+）上构建成重组质粒pET-NS1，转化受体菌E.coli BL21-DE3 感受态细 胞，经酶切鉴定及序列分析，筛选出正确重组质粒转化子。【结果】经终浓度 5 mmol·L-1乳糖诱导，SDS－PAGE电 泳结果显示，重组蛋白NS1 得到大量表达，分子质量约为 26kD。经Western-blotting分析，表达蛋白能与阳性血 清发生特异性反应，而与阴性血清不反应；ELISA检测显示，在被检血清稀释1 280 倍时，阳性血清的OD650值大约 是阴性血清的3倍，差异明显。【结论】重组蛋白NS1表达量高，易于纯化并且具有良好的血清学反应的特异性。 关键词：猪流感病毒；NS1基因；反应原性 Cloning, Prokaryotic Expression and Antigenicity Analyzing of NS1 Gene of H9N2 Swine Influenza Virus 1,2 2 2 2 2 1 WANG Fang-kun , YUAN Xiu-fang , WANG Yi-cheng , ZHANG Cun , XU Li-hua , LIU Si-dang 1 ( College of Animal Sciences and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 271018, Shandong; 2Insititute of Animal Sciences and Veterinary Medicine, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021) Abstract: 【Objective 】The NS1 gene of H9N2 subtype influenza A virus was expressed in prokaryotic expression system to obtain recombinant protein. 【Method 】The NS1 gene of H9N2 subtype influenza A virus was amplified by RT-PCR, and then cloned into prokaryotic expression vector pET-28a (+).The recombinant plasmid pET-NS1 was extracted after being transformed into E.coli BL21-DE3 competent cells. Restriction enzymes digestion and sequences analysis demonstrated that the recombinan