PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌.pdfVIP

中国农业科学 2006,39(5):990-996 Scientia Agricultura Sinica PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌 1 1 1 2 1 杨 洋 ，张 伟 ，袁耀武 ，钟晓英 ，马 雯 1 2 （河北农业大学食品科技学院微生物检测研究室 保定 071001 ； 河北省保定市疾病预防控制中心 保定 071000 ） 摘要: 【目的】利用PCR技术,无需增菌，直接检测乳品中的金黄色葡萄球菌。【方法】通过溶剂提取的方法 从人工样品中提取模板，以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因（nuc ）为靶基因，经过PCR扩增得到279 bp的产物。 经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。采用PCR方法实际检测了乳品中的金黄色葡萄球菌，同时，与国标GB 4789.10—94 方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌测试片 Petrifilm RSA.Count Plate 及 Baird-parker+RPF Agar进行了比较。【结果】PCR方法的灵敏度高，全脂乳和脱脂乳检测的检出限为10 CFU/ml， 奶酪检测的检出限为55 CFU/g，可在6 h内完成对乳品中金黄色葡萄球菌的检测，比目前普遍采用的先增菌再进 行PCR检测的方法缩短了12～24 h。与国标方法相比，PCR方法的符合率为94.3％，敏感性为100％。【结论】采 用溶剂提取制备模板的方法可有效的用于PCR直接检测(无需增菌)乳及乳制品中的金黄色葡萄球菌。 关键词：PCR；检测；乳品；金黄色葡萄球菌 Detection of Staphylococcus aureus in Dairy Products by Polymerase Chain Reaction Assay 1 1 1 2 1 YANG Yang , ZHANG Wei , YUAN Yao-wu , ZHONG Xiao-ying , MA Wen ( 1 College of Food Science and Technology, Laboratory for Microorganism Detection Agriculural University of Hebei , Baoding 071001 ; 2 Baoding Center for Disease Control and Prevention in Hebei Province, Baoding 071001) Abstract: 【Objective 】A uniplex polymerase chain reaction(PCR) assay was developed for direct detection of Staphylococcus aureus without enrichment in dairy products. 【Method 】A solvent extraction procedure was successfully modified for extraction of Staphylococcus aureus DNA from artifically contaminated whole milk, skim milk and cheese. Primer targeting the thermostable nuclease gene (nuc) was used in the uniplex PCR. A DN