Pen a 1表位抗原多克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(15):3191-3198 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.15.013 Pen a 1 表位抗原多克隆抗体的制备及鉴定 1 1 2 1 1 1 1 1 1 赵 杰 ，高美须 ，潘家荣 ，王志东 ，兰丽平 ，睢 珂 ，许舒婷 ，刘超超 ，牟 慧 1 2 （中国农业科学院农产品加工研究所，北京100193； 中国计量学院生命科学院，杭州310018） 摘要：【目的】建立一种识别、检测致敏蛋白的新方法。【方法】Pen a 1 为虾中主要的致敏蛋白，从其5 个主要 IgE 结合区中选择一段具有代表性的（85—105 位）含21 个氨基酸的多肽序列，进行化学合成，将多 肽分别与匙孔血蓝蛋白（KLH）和牛血清白蛋白（BSA）偶联，制得免疫原和包被原，免疫原免疫新西兰纯种 白兔得到多克隆抗体。以刀额新对虾蛋白、卵清蛋白、花生蛋白和牛奶蛋白为样品，免疫印迹鉴定多克隆抗 体对刀额新对虾中 Pen a 1 蛋白的特异性。【结果】经 Ellman 试剂测定多肽与 KLH、BSA 的偶联比分别为 6 12 ﹕1 和8 ﹕1。间接非竞争ELISA 测定多克隆抗体的效价达 1.024×10 ，间接竞争ELISA(icELISA)测定该多 -1 -1 克隆抗体对多肽的IC 和 IC 分别为0.4324 μg·mL 和0.0004 μg·mL ，表明多克隆抗体对多肽具有较强的灵 50 10 敏性。免疫印迹试验结果表明，此多克隆抗体仅可识别刀额新对虾蛋白中的Pen a 1 蛋白，对所选其它物种 蛋白无响应。【结论】通过人工合成多肽制备的抗体可用于目标致敏蛋白质的检测分析，该方法快捷灵敏，且 具有较高的特异性。 关键词： Pen a 1；表位多肽抗原；多克隆抗体；间接竞争ELISA；免疫印迹 Preparation and Identification of Polyclonal Antibody of One Pen a1 Epitope Peptide 1 1 2 1 1 1 ZHAO Jie , GAO Mei-xu , PAN Jia-rong , WANG Zhi-dong , LAN Li-ping , SUI Ke , 1 1 1 XU Shu-ting , LIU Chao-chao , MOU Hui 1