半番鸭羽色相关基因均一化差减文库的构建和鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(22):4688-4696 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.22.015 半番鸭羽色相关基因均一化差减文库的构建和鉴定 1 1,3 2 1 1 1 1 3 郑嫩珠 , 陈晓燕 , 卢立志 , 朱志明 , 缪中纬 , 辛清武 , 陈 晖 ,肖天放 1 2 3 （福建省农业科学院畜牧兽医研究所, 福州 350013 ；浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州 31002 1；福建农林大学动物科学学院，福州 350002 ） 摘要： 【目的】分离半番鸭羽色相关基因，探索半番鸭羽色基因表达调控的分子机制。 【方法】以半番鸭白 羽皮肤和黑羽皮肤分别作为试验组 （tester）和驱动组 （driver），利用双链特异性核酸酶 （duplexspecific nuclease，DSN）介导的均一化消减杂交方法，构建半番鸭羽色相关基因消减cDNA 文库，同时采用实时荧光定量 PCR 方法对文库质量进行验证。【结果】①从文库中随机选取 144 个阳性克隆进行测序分析，最终共获得64 条有 效序列，平均长度为1 031 bp；经BLAST 比对发现，21 条具有同源序列，且同源性平均为92.8%；43 条未找到匹 配序列，推测可能为羽色相关新基因；②Geneontology 功能分析表明，已知基因参与信号转导、细胞结构、物质 转运、细胞凋亡、细胞与机体防御、转录与表达调控等诸多生物学过程，并且与色素形成和转运存在不同程度的 相关性。【结论】经实时荧光定量PCR 鉴定后，所建文库质量良好，能够有效地富集白羽皮肤特异表达基因。 关键词：半番鸭; 羽色基因; 双链特异性核酸酶 （DSN）; 消减杂交; 荧光定量PCR Construction and Identification of Normalized Subtractive cDNA Library of Plumage Color-Related Genes in Mule Duck 1 1,3 2 1 1 1 ZHENG Nen-zhu , CHEN Xiao-yan , LU Li-zhi , ZHU Zhi-ming , MIAO Zhong-wei , XIN Qing-wu , 1 3 CHEN Hui , XIAO Tian-fang 1 2 ( Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350013 ; Institute of