编码棉花胞质铜锌超氧物歧化酶基因的克隆与表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(8):1602-1609 Scientia Agricultura Sinica 编码棉花胞质铜锌超氧物歧化酶基因的克隆与表达分析 1,2 1 1 1 胡根海 ，喻树迅 ，范术丽 ，宋美珍 1 2 （中国农业科学院棉花研究所，安阳 455004 ； 河南科技学院，新乡 453002 ） 摘要：【目的】克隆编码棉花胞质铜锌超氧化物岐化酶基因并分析其表达特性。【方法】采用 RACE 技术克隆 基因，Northern blotting 检测基因的表达谱；采用氮蓝四唑（NBT）光下还原法测定不同生育期的酶活性。【结 果】获得了棉花胞质铜锌超氧化物岐化酶基因 cDNA 全长序列（GenBank 注册号：DQ445093）；该基因 cDNA 全长 共 682 bp，开放阅读框 456 bp，编码 152 个氨基酸。分子结构预测结果：酶蛋白理论分子量约为 15.03 kD，理 论等电点为6.09，与其它植物的蛋白质氨基酸序列同源性在82%～87%之间。Southern blotting显示不同棉种该 基因的拷贝数基本一致，均属于低拷贝基因。Northern blotting 显示该基因在不同的组织、不同的生育期表达 量不同；酶活性测定显示盛花期最高。【结论】棉花胞质铜锌超氧化物岐化酶基因在陆地棉中属于低拷贝数基因； 在整个生育期中mRNA的含量呈规律性动态变化，前期较低，后期较高，在盛花期达到顶峰；变化曲线与不同时期 的酶活性变化一致；不同器官的基因表达检测结果显示：基因在根中表达量最高，叶片次之，花中的表达最低。 关键词：棉花；铜锌超氧物歧化酶；基因；克隆 Cloning and Expressing of a Gene Encoding Cytosolic Copper/Zinc Superoxide Dismutase in the Upland Cotton 1,2 1 1 1 HU Gen-hai , YU Shu-xun , FAN Shu-li , SONG Mei-zhen 1 ( Cotton research institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Anyang 455004; 2Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453002) Abstract: 【Objective 】A gene encoding superoxide dismutase (SOD) was cloned from senescent leave of cotton (Gossypium hirsutum) ， and its expressing profile was analyzed. 【Method 】The gene was cloned by Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE) method. Northern blotting was used to show the profile of the gene expression ， and the enzyme activity was mensurated by NBT deoxidization method in different