成花素基因PdFT的克隆及其对牡丹成花的影响.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(13):2613-2624 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.13.013 成花素基因PdFT 的克隆及其对牡丹成花的影响 朱富勇，刘传娇，薛璟祺，王顺利，张 萍，任秀霞，张秀新 （中国农业科学院蔬菜花卉研究所/农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室，北京 100081） 摘要：【目的】克隆紫牡丹 FT 同源基因，分析其表达模式以及对紫牡丹成花的调控作用。【方法】以紫 牡丹为试验材料，通过 RT-PCR 的方法克隆紫牡丹FT 同源基因PdFT。通过实时荧光定量PCR 分析 PdFT 在 紫牡丹不同组织、紫牡丹开花物候期各过程及不同处理的表达情况，并探讨PdFT 与花芽发育状态的关系。 同时，将克隆到的紫牡丹 PdFT 克隆到表达载体 pET-28a 上，构建融合表达载体 pET-28a-PdFT，转化到大 肠杆菌 BL21 （DE3 ）并诱导表达。【结果】克隆得到包括完整开放阅读框（ORF ）的PdFT cDNA 序列，ORF 长度为 522 bp，编码173 个氨基酸，GenBank 登录号为 KF113360。氨基酸序列比对表明：PdFT 蛋白具有一 个典型的 PEBP 结构域，属于PEBP 家族；并且与GenBank 中已克隆的FT 同源基因具有高度的同源性。实时 荧光定量PCR 分析结果表明，PdFT 在紫牡丹根、茎、叶、芽中均有表达，芽中表达量最高，叶中表达量最 低。紫牡丹开花物候期各过程 PdFT 的表达分析表明，在花芽膨大期表达量最高，随着花蕾的发育，PdFT 的表达量逐渐降低。PdFT 在不同光照温度条件下的表达分析表明，短日照和低温处理均抑制 PdFT 基因的 表达。不同状态花蕾中 PdFT 的表达分析结果表明，败育花蕾PdFT 的表达量低于正常花蕾。同时，GA 及去 3 叶处理均能提高PdFT 的表达量。所构建的原核表达载体，经 IPTG 诱导和 SDS电泳检测结果表明，表 达蛋白与预期蛋白大小一致。【结论】紫牡丹 PdFT 与已克隆的FT 同源基因高度同源，属于FT 亚家族，在 紫牡丹顶芽中表达量最高，可能调控牡丹开花，PdFT 的克隆及表达分析为研究紫牡丹成花的分子机理奠定 了基础。 关键词：紫牡丹；FLOWERING LOCUS T；实时定量PCR；原核表达 Isolation of Florigen Gene PdFT and Its Effects on Flowering of Tree Peony （Paeonia delavayi Franch.） ZHU Fu-yong, LIU Chuan-jiao, XUE Jing -qi, WANG Shun-li, ZHANG Ping, REN Xiu-xia, ZHANG Xiu-xin （Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Horticultural Crops, Ministry of Agriculture, Beijing 100081 ) Abstract : 【Objective 】The objective of this study was to clone the homolog of FT gene from tree peony and analyze the expression pattern and the potential function of flowering locus T (FT) of flower