大白菜果胶甲酯酶基因BrPME1的克隆及特征分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(2):325-334 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.02.012 大白菜果胶甲酯酶基因BrPME1的克隆及特征分析 刘志勇，李承彧 ，叶雪凌，王晓霞，冯 辉 （沈阳农业大学园艺学院，沈阳 110866 ） 摘要：【目的】克隆大白菜果胶甲酯酶基因，为进一步探讨果胶代谢在大白菜育性调控中的分子机制提供帮 助。【方法】利用cDNA-AFLP 技术分析大白菜核雄性不育两用系‘AB02’可育株( msms)和不育株(Msms)花蕾的基因 表达谱，在可育株混合花蕾 cDNA 中扩增出 1 条特异条带 TDF-24，通过 RACE 技术扩增该基因的 cDNA 全长序列， 采用生物信息学软件分析所克隆基因的编码蛋白特性，利用荧光定量PCR技术分析基因时空表达模式。【结果】该 基因编码大白菜果胶甲酯酶（EC 1），被命名为 BrPME1 （GenBank 登录号：HM185497）。BrPME1 全长 cDNA 序列为1 290 bp，编码1个包含363个氨基酸的前体蛋白。BrPME1蛋白 N末端1—23位为信号肽，成熟蛋白含有 保守的果胶甲酯酶酶活结构域，而不含酶活抑制位点。预测 BrPME1 蛋白含有 10 个磷酸化位点、1 个酰胺化位点 和6个 N端豆蔻酰基化位点。BrPME1 在两用系不育株花蕾中表达量很低，在可育株的大花蕾以及成熟花药中高水 平表达。【结论】 BrPME1 是一个受大白菜细胞核雄性不育基因抑制的果胶甲酯酶基因家族成员。 关键词：大白菜；复等位基因；细胞核雄性不育；果胶甲酯酶；基因表达 Cloning and Characterization of a Pectin Methylesterase Gene BrPME1 in Chinese Cabbage LIU Zhi-yong, LI Cheng-yu, YE Xue-ling, WANG Xiao-xia, FENG Hui (Department of Horticulture, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866) Abstract: 【Objective 】 This paper aims at cloning a pectin methylesterase gene in order to provide assistance to study the roles of the pectin metabolism in the fertility regulation of Chinese cabbage. 【Method 】Analysis of gene differential expression was performed by cDNA-AFLP in the genic male sterile line ‘AB02’of Chinese cabbage, and a differentially expressed cDNA fragment, TDF-24, was found only in fertile plants. The full-length cDNA of the gene related to TDF-24 was amplified by RACE and RT-PCR, and the characteristics of the deduced protein were analyzed using bioinformatics