番茄水通道蛋白基因SlAQP的克隆与序列分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(2):302-310 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.02.012 番茄水通道蛋白基因SlAQP 的克隆与序列分析 李 仁，吴新新，李 蔚，杨荣超，赵永钦，温常龙，赵 冰，郭仰东 （中国农业大学农学与生物技术学院，北京100193） 摘要：【目的】通过分析克隆得到的番茄水通道蛋白SlAQP 基因的cDNA 全长序列特征、编码蛋白的细胞定位 及其在番茄材料Mirco Tom 中经干旱胁迫后的表达模式，为进一步研究番茄在逆境下的抗逆机制及加快番茄抗逆 育种积累资料。【方法】采用RACE 技术克隆番茄水通道蛋白基因的 cDNA 全长，结合生物信息学软件分析该基因 的编码蛋白特性；利用基因枪转化法将SlAQP 基因与GFP 融合的瞬时表达载体 （SlAQP::GFP）转入洋葱表皮细胞， 对该基因进行亚细胞定位；利用 Real time-PCR 分析该基因在番茄品种Mirco Tom 中经干旱胁迫下的表达机制。 【结果】SlAQP 基因（GenBank 登录号：HQ433337）cDNA 全长为1 107 bp，编码区含852 bp，共编码283 个氨基 酸。生物信息学软件分析表明，SlAQP 基因含有6 个跨膜区，2 个NPA 单元，其氨基酸残基与MIP 家族蛋白保守 区序列完全一致，且该基因氨基酸序列与其它物种PIP 类质膜型水通道蛋白氨基酸序列具有很高的同源性。11 个 物种间的聚类分析表明，SlAQP 基因编码的蛋白与马铃薯质膜型水通道蛋白遗传距离最近。细胞定位结果确认 SlAQP 基因编码蛋白在细胞质膜上发挥生物学作用。Southern 杂交结果显示，SlAQP 基因在番茄基因组DNA 中呈 单拷贝。Real time-PCR 分析结果证实，干旱胁迫下该基因表达量总体呈下降趋势。【结论】对番茄水通道蛋白 SlAQP 基因在干旱胁迫后的表达模式分析，预示该基因表达受逆境条件的影响，为今后进一步探讨其在干旱胁迫 中发挥的作用提供了重要信息。 关键词：番茄；水通道蛋白；序列分析；细胞定位；Real time-PCR Cloning and Sequence Analysis of the Aquaporins Gene SlAQP in Tomato LI Ren, WU Xin-xin, LI Wei, YANG Rong-chao, ZHAO Yong-qin, WEN Chang-long, ZHAO Bing, GUO Yang-dong (College of Agr iculture and Biotechnology, China Agricultural University, Beijing 100193) Abstract: 【Objective 】 To provide basal data for mechanism of tomato’s drought resistance and cultivar development, the sequence characteristics of the aquaporin gene SlAQP in tomato were analyzed, the coded protein was intracellar located and the expression profiling of the Mirco Tom tomato was studied after treatment under drought stress. 【Method 】The rapid-amplification of cDNA ends (RACE) was used to amplify the full-length SlAQP gene, and the bioinformatics