干旱和盐胁迫条件下枣树谷胱甘肽过氧化物酶基因（ZjGPX）的差异表达及功能分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(14):2806-2817 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.14.012 干旱和盐胁迫条件下枣树谷胱甘肽过氧化物酶基因（ZjGPX） 的差异表达及功能分析 1，2 3 3 1，2 1，2 3 1，2 1，2，3，4 5 肖 蓉 ，罗慧珍 ，张小娟 ，邓 舒 ，张春芬 ，任 莹 ，孟玉平 ，曹秋芬 ，聂园军 1 2 3 （山西省农业科学院果树研究所，山西太谷 030815 ；山西省农业科学院生物技术研究中心，太原 030031 ；山西大学生物工程学院，太原 030006 ； 4 山西省农业科学院农作物品种资源研究所/农业部黄土高原作物基因资源与种质创制重点实验室，太原 030031 ； 5 山西省农业科学院农业资源与经济研究所，太原 030031 ） 摘要：【目的】研究枣树谷胱甘肽过氧化物酶基因（ZjGPX ）的功能，为其在果树抗逆基因工程改良中的利用 奠定基础。【方法】以‘壶瓶枣’（ Ziziphus jujuba Mill. Hupingzao）结果枝构建的 cDNA 文库中选取一条与其 他植物谷胱甘肽过氧化物酶基因有较高同源性的序列为研究对象进行序列分析，预测其功能。通过实时荧光定量 技术分析目的基因在盐胁迫及干旱胁迫条件下的表达特性，并构建植物表达载体 PEZR(K)-LNY-ZjGPX，运用农杆 菌介导法，将 ZjGPX 转入拟南芥，对转基因及野生拟南芥植株作盐胁迫及干旱胁迫处理，验证其抗逆功能。【结果】 ZjGPX 编码序列（CDS）长510 bp，编码169 个氨基酸。Blast比对发现该基因与多种植物 GPX 基因具有高度同源 性（80%）。实时荧光定量分析表明，在辣椒枣组培苗中，ZjGPX 能够被一定浓度的干旱胁迫和盐胁迫诱导表达， 且反应迅速，仅胁迫15 min，其相对表达量与对照相比即出现大幅升高，暗示该基因可能对枣树抗旱性和耐盐性 具有重要的作用。结合50 μg·mL-1 Kan抗性筛选、PCR验证及激光共聚焦显微镜观察，共获得10株阳性转基因拟 南芥株系，干旱及盐胁迫处理结果显示，转基因拟南芥种子萌发率均高于野生型拟南芥；成株在胁迫15 d后，野 生型拟南芥出现叶片发黄、萎蔫、整株干枯、死亡的迹象，而转 ZjGPX 拟南芥生长基本正常。表明过表达 ZjGPX 拟南芥株系具有良好的耐旱性和耐盐性。【结论】ZjGPX 在植物的干旱和盐胁迫应答反应机制中起重要作用，过量 表达 ZjGPX 可提高转基因拟南芥的耐旱和耐盐能力。 关键词：枣树；ZjGPX；差异表达；胁迫；转基因拟南芥 Differential Expression and Functional Analysis of Glutathione Peroxidase Gene from jujube (ZjGPX ) Under Drought and Salt Stresses 1,2 3 3 1,2 1,2 3 XIAO Rong , LUO Hui-zhen , ZHANG Xiao-juan , DENG Shu , ZHANG Chun-fen , REN Ying , MENG