渐绿木霉抑菌物质的分离纯化及其对植物病原菌的抑制作用.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(5):882-888 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.05.06 渐绿木霉抑菌物质的分离纯化及其对植物病原菌的抑制作用 张 量，张敬泽 （浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所，杭州 310058 ） 摘要：【目的】从木霉（ Trichoderma spp. ）代谢产物中获得对疫霉菌（Phytophthora spp.）有抑制作用的 活性拮抗化合物，并评价其对其他植物病原菌的生防潜力，为木霉生防菌株及其产生拮抗化合物的利用提供依据。 【方法】用玻璃纸筛选法筛选产生拮抗化合物的木霉菌株，这些化合物对疫霉菌有强烈的抑制活性。在 PDA 上培 养获得的木霉菌株作为接种体，进一步接种在稻米培养基上扩大培养，用于拮抗化合物的提取。木霉培养物经乙 酸乙酯萃取、过滤和浓缩等程序，获得最初的粗提物。粗提物进一步通过柱层析、薄层层析纯化和生物活性测定， 确定活性组分并获得纯的样品。依据样品的化学特性，采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）进行化学结构鉴定，确 定拮抗化合物的化学分子式和结构。选用不同类群的植物病原菌，包括卵菌门的辣椒疫霉（P. capsici ）和黄瓜 疫霉（ P. melonis ）、子囊菌门中的尖镰孢（Fusarium oxysporum ）和担子菌门的立枯丝核菌（Rhizoctonia solani ）， 测定拮抗化合物对它们发育不同阶段的拮抗活性。【结果】最初筛选试验结果显示，渐绿木霉（ T. viridescens ） 菌株TS0404能产生对疫霉菌有强烈抑制活性的拮抗化合物。分离、纯化和生物活性试验表明，具有生物活性的活 性组分是一种黄色油状液体。质谱图揭示该化合物最大离子峰 166，化合物被鉴定为 6-戊基-2H-吡喃酮 （6-pentyl-2H-pyran-2-one，6-PP）。生物活性测定结果显示，该化合物对辣椒疫霉、黄瓜疫霉、立枯丝核菌、 尖镰孢菌丝生长有显著抑制作用（EC -1 50 分别为 115.26、99.58、126.46 和 315.75 μg·mL ），其中对黄瓜疫霉抑制 效果最好，300 μg·mL-1 浓度完全抑制黄瓜疫霉菌丝生长。该化合物对辣椒疫霉和黄瓜疫霉游动孢子囊萌发也有显 著抑制效果（EC -1 -1 50 分别为168.67和111.87 μg·mL ），其中对黄瓜疫霉游动孢子囊萌发抑制效果最好，在400 μg·mL 时，完全抑制其游动孢子囊的萌发。此外，6-戊基-2H-吡喃酮还对尖镰孢分生孢子和立枯丝核菌菌核萌发有显著 的抑制效果，其对尖镰孢分生孢子萌发抑制的EC -1 -1 50 为151.81 μg·mL ；300 μg·mL 时，完全抑制立枯丝核菌菌核的 萌发。【结论】从渐绿木霉筛选分离获得了 6-戊基-2H-吡喃酮，其对卵菌中的辣椒疫霉和黄瓜疫霉子实体有强烈 的抑制活性，对尖镰孢和立枯丝核菌菌核也有显著的抑制作用，显示该物质是一种广谱性的拮抗化合物，在作物 疫病防治中具有潜在的应用价值。 关键词：渐绿木霉；生防菌筛选；拮抗化合物；结构鉴定；6-戊基-2H-吡喃酮 Isolation and Purification of Active Compound from T