家蚕感染质型多角体病毒相关基因Arylphorin的克隆与鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(21):4594-4602 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.21.023 家蚕感染质型多角体病毒相关基因Arylphorin 的克隆与鉴定 1,2,3 1 2,3 2,3 2,3 2,3 2,3 2,3 高 坤 ，邓祥元 ，吴 萍 ，覃光星 ，侯成香 ，钱荷英 ，耿 涛 ，郭锡杰 1 2 3 （江苏科技大学生物与化学工程学院，江苏镇江 212018 ； 江苏科技大学蚕业研究所，江苏镇江 212018 ； 中国农业科学院蚕业研究所， 江苏镇江 212018 ） 摘要： 【目的】克隆家蚕Arylphorin 的cDNA 全长序列，利用生物信息学对该序列进行分析，检测该基因在 家蚕感染质型多角体病毒（Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus, BmCPV ）后的表达量变化模式，为进 一步研究其生物学功能奠定基础。 【方法】以家蚕中肠总RNA 为模板反转录合成cDNA，利用 cDNA 末端快速扩增 （RACE ）技术克隆家蚕Arylphorin 的全长cDNA；通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR ）分析其组织表达模式和在家 蚕感染BmCPV 后的表达差异。【结果】克隆得到了家蚕Arylphorin 的全长cDNA （命名为BmAryl ），在GenBank 登 录号为JN581664。该基因的cDNA 全长为2 260 bp，包含1 个26 bp 5′非翻译区和1 个143 bp 的3′非翻译区，3′ 非翻译区包含有终止密码子、多聚腺嘌呤信号AATAAA 和poly(A)尾。其最大开放阅读框（ORF ）为2 091 bp，编 码的蛋白由696 个氨基酸组成，预测蛋白分子量为 82.8 kD，等电点为6.07。多序列比对和系统进化分析发现， 家蚕BmAryl 蛋白与家蚕的性别专一贮藏蛋白2 相似性最高，为66%。BmAryl 主要在家蚕的脂肪体和血淋巴中表达， 精巢和卵巢中的表达量无明显差别；而在家蚕感染BmCPV 后该基因在中肠的表达量明显下调。【结论】成功克隆 获得BmAryl 的全长cDNA，其编码的蛋白质属于芳香蛋白家族, BmAryl 主要在家蚕的脂肪体和血淋巴中表达，不 存在性别专一性，且家蚕感染BmCPV 后BmAryl 在中肠的表达明显下调。 关键词：家蚕；质型多角体病毒；Arylphorin；中肠 Cloning and Identification of Arylphorin from Silkworm Infected by Cytoplasmic Polyhedrosis Virus 1,2,3 1 2,3 2,3 2,3 GAO Kun , DENG Xiang-yuan , WU Ping , QIN Guang-xing , HOU Cheng-xiang , QIAN He-ying2,3, GENG Tao2,3, GUO Xi-jie 2,3 1 ( College of Biotechnology and Chemical Engineering, Jiangsu University of Science and Technology, Zhenjiang 2