小菜蛾三个普通气味受体基因的克隆及表达谱.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(9): 1735-1742 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.09.008 小菜蛾三个普通气味受体基因的克隆及表达谱 1 2 2 1 孔畅仪 ，王桂荣 ，刘 杨 ，严善春 1 2 （东北林业大学林学院，哈尔滨 150040； 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193） 摘要：【目的】克隆小菜蛾（Plutella xylostella ）触角中3 个气味受体基因，明确这3 个气味受体在不同 组织中的表达分布，进而推测这3 个基因的功能，为进一步深入研究奠定基础。【方法】通过新一代高通量测序技 术对小菜蛾成虫触角进行转录组测序，获得小菜蛾的转录组数据信息，通过对高质量序列的拼接组装、基因鉴定 和功能注释，并通过Blastx 基于数据库进行相似性比对分析，预测小菜蛾的气味受体候选基因；设计引物通过克 隆得到3 条普通气味受体基因的全长序列，并利用半定量RT-PCR 研究其在雌、雄成虫9 个不同组织中的表达。【结 果】根据预测的基因序列，设计特异引物，克隆得到 3 条普通气味受体基因的全长序列，分别命名为PxylOR16、 PxylOR17 和PxylOR18 （GenBank 登录号分别为KF717601—KF717603 ）。PxylOR16 开放阅读框全长为1 218 bp， 编码 406 个氨基酸；PxylOR17 开放阅读框全长为 1 200 bp，编码400 个氨基酸；PxylOR18 开放阅读框全长为 1 191 bp，编码397 个氨基酸。选择已报道的鳞翅目昆虫家蚕（Bombyx mori ）、烟芽夜蛾（Heliothis virescens ） 和棉铃虫（Helicoverpa armigera ）的气味受体，以及已报道的小菜蛾的6 条性信息素受体与 1 条非典型气味受 体与本实验克隆得到的 3 个气味受体进行序列比对和进化树分析，结果显示这 3 个气味受体基因与非典型气味受 体和性信息素受体同源性低，而与其他的普通气味受体聚类在一起，且PxylOR16、PxylOR17 和PxylOR18 彼此同 源性较低。半定量的结果显示，3 个普通气味受体基因均在触角中表达量最大，在其他嗅觉感器，如喙、下唇须 和头部中也有一定量的表达，雌、雄间无显著差异。另外，PxylOR17 在雌蛾生殖器中，PxylOR18 在雌蛾腹中也有 一定表达。但3 种气味受体基因在雌、雄蛾的胸、足和翅等组织中均不表达。【结论】鉴定和克隆了3 个小菜蛾气 味受体基因，明确这些气味受体基因在小菜蛾不同组织中的表达水平，通过进化树分析、序列比对和组织表达谱 分析确定PxylOR16、PxylOR17 和PxylOR18 为3 条普通气味受体，且在功能上高度分化。根据半定量RT-PCR 的结 果，推测这 3 个基因可能参与了普通气味分子的识别过程，此外PxylOR17 和PxylOR18 还可能参与了信息素的产 生和释放过程。 关键词：小菜蛾；触角；气味受体；基因克隆；半定量RT-PCR Gene Cloning and Expression Analysis of Three Odorant Receptors in the Diamondback Moth (Plutella xylostella) 1 2 2 1 KONG Chang-yi , WANG Gui-rong , LIU Yang , YAN Shan-chun 1