野生大豆耐盐相基因的克隆与序列分析.pdf

摘要 盐渍化是影响农作物生长和产量的最主要因素之一。据估计．盐渍化影响着4×10。到9 ×108公顷的土地，是目前农业生产用地的三倍多。培育耐盐作物品种是改良和利用盐碱地的 有效措施。野生大豆是栽培大豆的近缘野生种，它具有极强的抗逆性，是大豆育种极为重要 的种质资源。因此研究野生大豆的耐盐性及分离其耐盐基因，对利用野生大豆优异基因资源 改良栽培大豆具有重要意义。 脯氨酸是分布最广泛的一种重要的有机渗透调节物质。在盐溃条件下时，不论是低等植 物，还是高等植物都可以积累游离的脯氨酸来缓解盐胁迫。脯氨酸合成酶(P5CS)是脯氨酸生 物合成途径中的限速酶，研究其功能对提高植物耐盐性有重要意义。 本研究通过同源序列法根据已经在Genbank登录的野生大豆同科植物的脯氨酸合成酶 (嘲基因的保守序列，分别设计两对引物．以野生大豆耐盐材料ZYD00659做为试材．通 过对其幼苗进行200mM CDD 结合位点和谷氨酸激酶、谷氨酸脱氢酶保守域，脯氨酸反馈抑制作用位点。使用NCBI 数据库分析，该基因有完整的P5CS(ProA)的保守域，被命名为6sP5CSl。 采用同样方法，得到了长度为560bp的cDNA片段，推断其编码186氨基酸的多肽，分子 重量为20，186kDa，等电点PI为4．73。使用NCBI CDD数据库分析，发现该基因有部分的PSCS (ProA)的保守域，被命名为白彤礴己 根据分离的GsPSCS2基因的保守序列设计一对引物，从野生大豆基因组DNAj-获得了长 度为1374bp的片段，含有5个外显子和4个内含子，并且外显子和内含子交界处有典型的 GT／AG结构，被命名为gGsP5CS20 5sP5CS2-与其它植物历岱基因的同源性非常高，但是出翮和白尼破i磅基酸一致性只有71 ％，却都有ProA保守结构域，所以推断GsP5CSl，白彤啦该是野生大豆Pscs基因的两种不 同类型。 关键词：野生大豆；耐盐性；GsPSCSl；GsPSCS2；克隆； Isolationand of SequenceAnalysis RelatedGeneinWild Salt—tolerance Soybean Abstract SaltsUessisoneofthemainfactorswhichaffectthe and of is growthoutput crops．It to4x105--9x108hectarelandWaS morethanthreetimesto estimatedthatup salinizeal，whichis howto salttaleranceis moleandmore land，SO presentagricultural improvecrops becoming fromwild has resistanceandis soybeanoaons important．Cultivated soybean，wildsoybeangreat reSOllreOs all forcultivated is to