RCCS模拟微重力对铜绿假单胞菌毒力编码基因和蛋白质谱的影响.pdfVIP

医药杂志2015年6月 27卷 鱼塑 鱼 里垒： !：2 !：鱼：』 ：Q! ·1· · 论著 · RCCS模拟微重力对铜绿假单胞菌毒力编码基因 和蛋白质谱的影响 黄玉玲 ，徐冰心，张 军，段育忠，杨建武 ，周金莲，董满库 ，李成林 ，崔 彦 [摘要] 目的 探讨三维细胞培养系统 (RCCS)模拟微重力环境对铜绿假单胞菌 (PA)毒力编码基 因表达及菌 体蛋 白质谱的影响。方法 应用RCCS建立PAATCC27853模拟微重力培养体系，实验组旋转瓶轴心与地面平行模 拟微重力环境，对照组即重力组旋转瓶轴心与地面垂直；采用实时荧光定量聚合酶链反应 (Real-timePCR)检测 cDNA 样本中毒力编码基因外毒素 (toxA)、弹性蛋 白酶 (1asB)、鼠李脂糖 (rhlA)、绿脓菌素 (phza2)mRNA的相对含量；利用 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术及 CM10芯片检测 PA菌体蛋 白质谱。结果 RCCS模拟微重力处理 14d 后 。Real—timePCR检测实验组 eDNA样本 中toxA、lasB、rhlA、phza2毒力编码基 因相对含量均低于对照组 (P0．05)； 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱检测发现有 82种小分子菌体蛋 白质 [荷 比在 (2—20)×10Da范围内]，两组42 种菌体蛋白相对含量表达差异有统计学意义，实验组2O种蛋白质相对含量表达高于对照组 ，22种蛋白质相对含量表 达低于对照组(P0．05)。结论 RCCS模拟微重力培养条件下 PA毒力编码基 因表达和菌体蛋 白质谱发生显著 变化。 [关键词 】 失重模拟 ；铜绿假单胞菌；基 因表达 ；蛋 白质谱 [中国图书资料分类号] R378．991；R856 [文献标志码] A [文章编号】 2095—140X(2015)06—0001-05 D『oI] 10．3969／j．issn．2095．140X．2015．06．001 EffectsofSimulatedM icrogravitywithRCCSontheExpressionofVirulenceEncodingGenesandProteinicPro- filesofPseudomonasAeruginosaM ycoprotein HUANG Yu．1ing ，XUBing—xin ，ZHANGJun ，DUANYu—zhong2，rANGJian—wu ，ZHOUJin．1ian。，DONGMan． ku ，LICheng．1in ，CUIYan (1．DepartmentofGeneralSurgery，thePeople~HospitalofDaxingDistrict，Beijing 102600，China；a．DepartmentofSpecialMedicalLaboratory Center，b．DepartmentofGeneralSurgery，c．Department ofPathology，2．306HospitalofPLA，Beijing100101，China) [Abstract] Objeetive Toinvestigatetheeffectsofsimulatedmicrogravitywiththerotarycellculturesystem (RCCS)ontheexpressionofvirulenceencodinggenesandproteinicprofilesofPseudomonasaeurginosa(PA)mycopro- tein．Methods Theculturedsystem ofPA ATCC27853undersimulatedmicrogravitywereestablishedusingRCCS，and thecontrolgroupwasorientedtoachievingnormalearthgravity，whileexperimentgroupsimulatedmicrogravity．Therela— tivecontentsoftoxA ，lasB，rhlA andphza2mRNAviurlenceencodinggenesineDNA samples