ministr合扩增体系的研制与开发.pdf

中文摘要 miniSTR复合扩增体系的研制与开发 摘 要 目的：在法医DNA检验中，STR技术已经广泛用于个人识别和亲权 鉴定方面。但是法医检案工作中，常常由于高温、潮湿、暴晒、微生物等 因素的影响，使检材中的DNA分子被损坏，发生断裂，分子变小，大片 段丢失。在这些情况下应用STR技术不能成功地得出结论，经常会出现 “优势扩增”或者“无效扩增”，这就给正确的DNA分型带来困难。重 新设计引物，减小扩增产物片段长度是目前解决DNA高度降解检材检验 问题的一种新的方法。2001年9·11恐怖事件时这种方法被应用于遇难者 CODIS系统内一些基因座侧翼序列不适合设计新的引物，或者等位基因 范围太大，使这些基因座的扩增片段长度难以缩短到理想长度(125bp)， 座。为解决这个问题，增加系统效能，非常有必要寻找CODIS系统之外 的更多的miniSTR基因座，并进行人群调查。因此，本实验的目的是在 数据库中筛选出适合中国汉族人群特征的miniSTR基因座，然后将其构 术工作组(TWGDAM)的指导方案，对复合扩增系统的灵敏度，基因座 的种属特异性，案例应用，降解模型，陈旧样本等法医学应用进行初步研 究。最终构建成符合中国汉族人群特征的miniSTR复合扩增体系，从而 推动法医DNA试剂盒的国产化进程。 方法：①参考Coble等的引物，在中国河北汉族120名无关个体中进 数据初步筛选出8个多态性较高、片段较短的miniSTR基因座；在中国 产物使用聚丙烯酞胺凝胶电泳分离，银染法显色，获得8个基因座的群体 遗传学数据和各基因座的常见等位基因。②采用国产DNA聚合酶构建这 中文摘要 据不同引物浓度√M92+浓度、不同退火温度、不同循环次数下复合扩增的 效果对复合体系进行优化。⑧根据群体遗传学研究的结果，应用分子克隆 技术构建各基因座等位基因标准分型物，并根据国际法医遗传学会 (internationalofforensic society 位基因进行命名，同时根据检测数据进行统计分析编制出miniSTR复合 扩增体系的基因分型模版。④对该荧光标记复合扩增体系的灵敏度、种属 特异性、可重复性及对陈旧、腐败降解检材DNA的检测能力进行了研究； 用实际案例进行验证，并与商品化试剂盒进行比较。 结果：①成功构建了两个荧光标记miniSTR复合扩增体系，其中复合 个基因座。应用该体系对300份中国汉族无关个体样本进行检验分析，经 群体遗传学计算，该系统的累积个人识别率和非父排除率分别为 件易于优化，采用国产Taq酶进行扩增，即可得到满意的扩增产物和分型 结果。相对于国外昂贵的试剂盒，它是一种成本低廉但效率高的miniSTR 基因座复合扩增体系。③应用分子克隆技术，对9个基因座的64个等位 基因进行克隆，经过调整各基因座等位基因的含量，构建出了两组复合体 系的等位基因标准对照体系。根据实验数据和测序的命名结果设置基因分 析命名参数指标，建立了两个荧光标记miniSTR复合扩增体系的基因分 型命名模版，可以对样本准确分型。④法医应用性研究证明该体系具有良 座在8种常见动物中均无特异性产物峰出现；对同一个体的不同组织检测 型；通过对陈旧样本和降解模型的研究证明，该体系对降解检材有良好的 扩增效果，较常规大片段STR试剂盒扩增成功率高，可用于常规试剂盒 扩增失败的降解样本的分型；通过8个实际案例证明，该体系能用于法医 学实践中，结果与鉴定结论一致。 结论：本实验成功的构建了适合中国汉族人群的两个荧光标记 310／3130 miniSTR复合扩增体系。该荧光标记复合扩增体系可应用于ABI 中文摘要 检测平台，该体系扩增条件易于优化，成本低廉，分型结果稳定，种属特 异性好，灵敏度和准确度高，对降解检材扩增成功率高，可以应用于法医 学实际检案中，特别适合对陈旧检材和降解检材的DNA检测。为国内法 验系统，具有重大的应用价值。 降解检材 英文摘要 The ofminiSTR